Přímá sada RT-qPCR II
Popis sady:
◮Přímá souprava RT-qPCR využívající reverzní transkriptázu Foreasy a DNA polymerázu Foreasy HS Taq vyvinutá společností Foregene s jedinečným reakčním pufrem činí tuto soupravu se silnou odolností a kompatibilitou a může přímo testovat reakci pomocí systému Foregene Lysis jako templátu.Tato sada se může použít pro sadu pro detekci nukleových kyselin COVID-19 a vývoj sady pro detekci nukleových kyselin pro jiné patogenní bakterie.
Popis
Direct RT-qPCR Kit poskytuje samostatně balený RT-qPCR pufr, vysoce účinnou Foreasy HS Taq DNA polymerázua Foreasy reverzní transkriptáza (MMLV),což je výhodné pro tvorbu back-end kitů a seřízení systému v rámci jednoduchého ověření.
Přímá souprava RT-qPCR využívající reverzní transkriptázu Foreasy a DNA polymerázu Foreasy HS Taq vyvinutá společností Foregene s jedinečným reakčním pufrem činí tuto soupravu se silnou odolností a kompatibilitou a může přímo testovat reakci pomocí systému Foregene Lysis jako templátu.Tato sada se může použít pro sadu pro detekci nukleových kyselin COVID-19 a vývoj sady pro detekci nukleových kyselin pro jiné patogenní bakterie.
Tato sada může být přímo součástí produktu IVD, lze ji snadno a rychle použít.Potřebuje pouze snadné ověření, bez dalšího vývoje.
Specifikace
500 T, 50 000 T
Součásti stavebnice
| Obsah sady (20 μL reakčního systému) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50 000 T | |
| Předvídavý Rinverzní transkriptáza (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNA polymeráza (5 U/μL) | 100 μl×1 | 1 ml×10 |
| 2× Direct RT-qPCRBuffer | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Návod | 1 | 1 |
Provozní kroky
A: Připravte šablonu a činidlo
1. Připravte připravený templát RNA (doporučuje se použít sadu Foregene Total RNA Isolation Kit série k extrakci a čištění templátu RNA) nebo produkt pro krakování vzorku (doporučuje se použít systém Foregene Lysis), specifické primery (10 μM) a další relevantní spotřební materiál, přístroj.
2. Vložte 2× přímý RT-qPCR pufr, ddH2O bez RNázy a 20× referenční barvivo ROX (pokud je potřeba) do krabice s ledem, aby se přirozeně roztavily, a jemně promíchejte.
B: Příprava systému RT-qPCR
Získejte poloviční objem reakčního pufru reakčního systému (například pokud je objem systému 20 μL, je třeba získat 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer). Proodpovídající množství enzymu, to navrhujemeM-MLV: 10-30 U/20 μL reakční systém,TaqDNA polymeráza：1-2 U/20 μL reakční systémtoto je náš návrh, měli byste jej vyzkoušet a upravit), přidejte RNA templát, specifické primery a sondy a přidejte ddH bez RNázy2O až 20 μl.Konkrétní přípravu reakčního systému RT-qPCR lze nalézt v následující tabulce 1.
Tabulka 1: Příprava systému RT-qPCR
| Komponent | Hlasitost | Závěrečné soustředění |
| 2× přímá vyrovnávací paměť RT-qPCR | 10 μL | 1× |
| Foreasy reverzní transkriptáza (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA polymeráza | 1-2 U | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Reverzní primer (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Sonda (4 μM) | 1 μl | 200 nM |
| Šablona (RNA nebo lyzát) | X μL | |
| 20× referenční barvivo ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μl | |
| Celkový objem | 20 μl |
Poznámka: Forward Primer a Reverse Primer jsou specifické primery cílového genu.Systém qPCR lze upravit podle praktických experimentálních a PCR modelů.Pro konečnou koncentraci většiny primerů doporučujeme 400 nM.Upravte objem konkrétních primerů a sond podle připravené koncentrace a doporučené konečné koncentrace.
1*: Vyberte vhodnou konečnou koncentraci referenčního barviva ROX podle různých kvantitativních nástrojů PCR.Optimální koncentrace referenčního barviva ROX běžných kvantitativních PCR přístrojů je uvedena v následující tabulce:
| Kvantitativní PCR přístroje | Konečná koncentrace ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,atd. | 1× (například přidejte 1μl 20×ROX Reference Dye do 20μL reakčního systému) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P a Mx4000 atd. | 0,5× (například přidejte 0,5μl 20×ROX Reference Dye do 20μL reakčního systému) |
| Roche PCR přístroj, Bio-Rad PCR přístroj, Eppendorf kvantitativní PCR přístroj atd. | Bez referenčního barviva ROX |
Skladování a trvanlivost
Souprava by měla být skladována při teplotě -20 ± 5 °C.Měl by být okamžitě uložen v termostatické chladničce -20 °C.Doba platnosti je 2 roky, pokud je skladován ve vhodném stavu.
