Souprava pro izolaci celkové RNA z buňky Souprava pro čištění celkové RNA z buňky
Popis sady:
Vysoce purifikovanou a vysoce kvalitní celkovou RNA lze získat z různých kultivovaných buněk za 11 minut.
Bez RNázy
Provoz při pokojové teplotě (15-25℃)
S kolonou na čištění DNA
Vysoký výtěžek RNA
Rychlý: Dokončete extrakci za 11 minut
Bezpečnost: Žádné Organické chemikálie
Popis
Tato souprava využívá rotační kolonu a formuli vyvinutou společností Foregene, která dokáže účinně extrahovat vysoce čistou a vysoce kvalitní celkovou RNA z buněk kultivovaných na 96, 24, 12 a 6jamkových destičkách.
Souprava poskytuje účinnou kolonu pro čištění DNA, která může snadno oddělit supernatant a buněčný lyzát, vázat a odstraňovat genomovou DNA.Obsluha je jednoduchá a časově nenáročná.
TRNA-only Column dokáže účinně vázat RNA pomocí jedinečného vzorce.Současně lze zpracovávat velké množství vzorků.
Součásti stavebnice
| Složení soupravy | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 t | 200 T | |
| Vyrovnávací paměť cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Pufr cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Vyrovnávací paměť RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Vyrovnávací paměť RW2 | 24 ml | 96 ml |
| DdH2O bez RNázy | 10 ml | 40 ml |
| Sloupec pouze RNA | 50 | 200 |
| Sloupec pro čištění DNA | 50 | 200 |
| Návod | 1 | 1 |
*Prosím, používejte rukavice a proveďte ochranná opatření během operace, protože pufr cRL1 a pufr RW1 obsahují dráždivé chaotropní soli.
Vlastnosti a výhody
■ Celý proces probíhá při pokojové teplotě (15-25 °C), bez ledové lázně a nízkoteplotní centrifugace.
■ Celá sada je bez RNázy, není třeba se obávat degradace RNA.
■ DNA-Cleaning Column specificky váže DNA, takže souprava může odstranit kontaminaci genomovou DNA bez přidání další DNázy.
■ Vysoký výtěžek RNA: Sloupec pouze s RNA a jedinečný vzorec může účinně čistit RNA.
■ Vysoká rychlost: snadné ovládání a dokončení za 11 minut.
■ Bezpečnost: Nevyžaduje se žádné organické činidlo.
■ Vysoká kvalita: Purifikovaná RNA má vysokou čistotu, neobsahuje protein a jiné nečistoty a může splnit různé následné experimenty.
Aplikace sady
Je vhodný pro extrakci a purifikaci celkové RNA z kultivovaných buněk v 96, 24, 12 a 6jamkových destičkách.
Pracovní postup
Diagram
Schéma baterie v agarózovém gelu Cell Total RNA Isolation Kit zpracovalo výše uvedené různé počty buněk, 20μl objemová eluce, vezměte 2μl purifikované celkové RNA 1 %.
Skladování a trvanlivost
Soupravu lze skladovat 12 měsíců při pokojové teplotě (15–25 ℃) nebo 2–8 ℃ po delší dobu (24 měsíců).
Pufr cRL1 může být skladován při 4 °C po dobu 1 měsíce po přidání 2-hydroxy-1-ethanthiolu (volitelně).
RNA není extrahována nebo jsou výtěžky RNA nízké
Účinnost obnovy často ovlivňuje celá řada faktorů, jako je: obsah RNA ve vzorku tkáně, způsob operace, eluční objem atd.
1. Za provozu byla provedena ledová lázeň nebo kryogenní (4 °C) centrifugace.
Doporučení: Pracujte při pokojové teplotě (15-25 °C) po celou dobu procesu, nevytvářejte ledovou lázeň a odstřeďujte při nízkých teplotách.
2. Nesprávné uchování vzorku nebo příliš dlouhá doba skladování vzorku.
Doporučení: Vzorky skladujte při -80 °C nebo zmrazte v tekutém dusíku a vyhněte se opakovanému použití zmrazování a rozmrazování;zkuste pro extrakci RNA použít čerstvou tkáň nebo kultivované buňky.
3. Nedostatečná lýza vzorku.
Doporučení: Při homogenizaci tkáně zajistěte, aby byla tkáň dostatečně homogenizována a aby byly tkáňové buňky dostatečně rozštěpeny, aby se vysvětlilo uvolňování RNA.
4. Eluent není přidán správně.
Doporučení: Potvrďte, že RNase-Free ddH2O se přidává po kapkách do středu membrány čistící kolony.
5. Do pufru RL2 nebo pufru RW2 nebyl přidán správný objem absolutního ethanolu.
Doporučení: Postupujte podle pokynů, přidejte správný objem absolutního etanolu do pufru RL2 a pufru RW2 a před použitím soupravy dobře promíchejte.
6. Dávkování vzorku tkáně není vhodné.
Doporučení: Použijte 10-20 mg tkáně nebo (1-5) × 106buněk na 500 μl pufru RL1, protože nadměrné používání tkáně může mít za následek sníženou extrakci RNA.
7. Nesprávný eluční objem nebo neúplná eluce.
Doporučení: Eluční objem purifikační kolony je 50-200 μl;pokud není eluční efekt uspokojivý, doporučuje se prodloužit dobu umístění při pokojové teplotě po přidání předehřátého ddH bez RNázy2O, např. 5-10 min.
8. Čistící kolona obsahuje ethanolový zbytek po promytí pufrem RW2.
Doporučení: Pokud po promytí pufrem RW2 zůstanou zbytky ethanolu, centrifugujte prázdnou zkumavku po dobu 1 minuty, čas pro operaci centrifugace prázdné zkumavky lze prodloužit na 2 minuty nebo lze purifikační kolonu umístit na 5 minut při pokojové teplotě, aby se adekvátně odstranil zbytkový etanol.
Purifikovaná RNA je degradována
Kvalita purifikované RNA souvisí s faktory, jako je uchování vzorku, kontaminace RNázou a manipulace atd.
1. Vzorky tkání nejsou uchovávány včas.
Doporučení: Pokud vzorky tkáně nebo buňky nejsou použity včas po odběru, okamžitě je kryokonzervujte při -80 °C nebo tekutém dusíku.K extrakci RNA použijte, kdykoli je to možné, nově odebraný vzorek tkáně nebo buněk.
2. Opakované zmrazování a rozmrazování vzorků tkáně.
Doporučení: Při uchovávání vzorků tkáně je nejlepší je nařezat na malé kousky pro konzervaci a při použití jeden z kousků odstranit, aby se zabránilo opakovanému zmrazení a rozmrazení vzorku a degradaci RNA.
3. Během operace je zavedena RNáza nebo nenosí jednorázové rukavice, masky atd.
Doporučení: Experimenty s extrakcí RNA se nejlépe provádějí v oddělených místnostech pro manipulaci s RNA a před experimentem se stůl vyčistí.
Během experimentu používejte jednorázové rukavice a masky, abyste minimalizovali degradaci RNA způsobenou zavedením RNázy.
4. Reagencie jsou během použití kontaminovány RNázou.
Doporučení: Pro související experimenty vyměňte za novou sadu Animal Total RNA Isolation Kit.
5. Centrifugační zkumavky, špičky atd. používané při manipulaci s RNA jsou kontaminovány RNázou.
Doporučení: Ujistěte se, že centrifugační zkumavky, špičky, pipety atd. používané při extrakci RNA jsou bez RNázy.
Purifikovaná získaná RNA ovlivňuje následné experimenty
RNA purifikovaná na purifikační koloně, pokud jsou ionty solí, obsah proteinu příliš velký, ovlivní následný experiment, jako je: reverzní transkripce,Northern Blot et al.
1. Eluovaná RNA má zbytky solí.
Doporučení: Ujistěte se, že byl do pufru RW2 přidán správný objem ethanolu a proveďte 2 promytí kolony pro čištění při rychlosti odstředění uvedené pro provoz;pokud tam jsou nějaké zbytky iontů soli, ponechte purifikační kolonu pufru RW2 po dobu 5 minut při pokojové teplotě a proveďte centrifugaci, abyste maximalizovali odstranění kontaminace solí.
2. Ethanolový zbytek v eluované RNA.
Doporučení: Potvrďte, že po promytí pufrem RW2 proveďte operaci odstřeďování prázdné zkumavky při rychlosti odstřeďování uvedené pro provoz, zvyšte dobu operace odstřeďování prázdné zkumavky na 2 minuty, pokud jsou stále zbytky etanolu, nebo ji ponechte při pokojové teplotě po dobu 5 m
