Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit pro rostliny bohaté na polysacharidy a polyfenoly
Popis sady:
Kat.č.RE-05021/05022/05024
Pro purifikaci celkové RNA z obecných rostlinných vzorků obsahujících vysoký obsah polysacharidů a polyfenolových složek.
Rychle extrahujte vysoce kvalitní celkovou RNA ze vzorků rostlin s vysokým obsahem polysacharidů a polyfenolů.
Použití kolony pro čištění DNA bez RNázy
Jednoduché – všechny operace jsou dokončeny při pokojové teplotě
Rychlý – operace může být dokončena za 30 minut
Bezpečné – nepoužívá se žádné organické činidlo 
Specifikace
50 přípravků, 200 přípravků
Souprava využívá spinovou kolonu a formuli vyvinutou společností Foregene, která dokáže efektivně extrahovat vysoce čistou a vysoce kvalitní celkovou RNA z různých rostlinných tkání s vysokým obsahem polysacharidů nebo polyfenolů.Poskytuje kolonu pro čištění DNA, která může snadno odstranit genomovou DNA ze supernatantu a tkáňového lyzátu.Kolona obsahující pouze RNA může účinně vázat RNA.Souprava dokáže zpracovat velké množství vzorků současně.
Celý systém neobsahuje RNázu, takže přečištěná RNA nebude degradována.Pufr PRW1 a Pufr PRW2 mohou zajistit, že získaná RNA není kontaminována proteinem, DNA, ionty a organickými sloučeninami.
Součásti stavebnice
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| ddH bez RNázy2O, sloupec pro čištění DNA |
| Sloupec pouze RNA |
Vlastnosti a výhody
■ Provoz při pokojové teplotě (15-25℃) během celého procesu, bez ledové lázně a nízkoteplotního odstřeďování.
■ Kompletní sada bez RNázy, není třeba se obávat degradace RNA.
■ Zvláště vhodné pro purifikaci RNA z rostlinných vzorků polysacharidů a polyfenolů.
■ DNA-Cleaning Column se specificky váže na DNA, takže souprava může odstranit kontaminaci genomovou DNA bez přidání DNázy.
■ Vysoký výtěžek RNA: Sloupec pouze s RNA a jedinečný vzorec může účinně čistit RNA.
■ Vysoká rychlost: snadné ovládání a dokončení do 30 minut.
■ Bezpečnost: nevyžaduje se žádné organické činidlo.
■ Vysoká kvalita: Purifikované fragmenty RNA mají vysokou čistotu, neobsahují protein a jiné nečistoty a mohou splňovat různé následné experimentální aplikace.
Parametry produktu
■ Následné aplikace: syntéza prvního vlákna cDNA, RT-PCR, molekulární klonování, Northern Blot atd.
■ Vzorek: Čerstvé nebo zmrazené rostlinné tkáně polysacharidů a polyfenolů
■ Dávkování: 50 mg rostlinné tkáně
■ Maximální vazebná kapacita RNA purifikační kolony: 80 μg
■ Eluční objem: 50-200 μl
Aplikace sady
Je vhodný pro extrakci a purifikaci celkové RNA z čerstvých nebo zmrazených vzorků rostlinných tkání (zejména čerstvých rostlinných listů) s vysokým obsahem polysacharidů a polyfenolů.
Pracovní postup
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus zpracoval 50 mg čerstvých listů polysacharidů a polyfenolů a 5 % purifikované RNA bylo testováno elektroforézou.
1: Banán
2: Ginkgo
3: Bavlna
4: Granátové jablko
Skladování a trvanlivost
Tato sada může být skladována po dobu 24 měsíců v suchu při pokojové teplotě (15-25℃);pokud je třeba skladovat delší dobu, lze jej skladovat při teplotě 2–8 °C.
Pufr PSL1 může být umístěn při 4 °C po dobu 1 měsíce po přidání β-merkaptoethanolu (doporučuje se přidávat ve stejnou dobu experimentu).
Sloup se ucpal
Po ucpání kolony je výtěžek RNA snížený nebo dokonce nemožné purifikovat RNA a získaná hmotnost RNA je nízká.
Analýza běžných příčin:
1. Přestávky na vzorky nejsou důkladné.
Rozbití vzorku nezpůsobí úplné zablokování ČISTICÍHO SLOUPCE DNA, ale ovlivní výtěžek a kvalitu RNA.Při rozbití vzorků doporučujeme rychlé mletí v dostatečném množství kapalného dusíku. Pokuste se rozdrtit buněčnou stěnu vzorku, buněčnou membránu a další tkáň.Pro rostlinné vzorky polyolových polysacharidů doporučujeme použít Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Při odsávání separovaného supernatantu vzorku pomocí DNA-Cleaning Column může být inhalována možná sraženina fragmentovaná buňkami.
Odebrané sedimenty po fragmentaci buněk způsobí, že sloupec RNA-ONLY Column bude zablokován při provádění operace adsorpce RNA (viz krok 6).Při odsávání tohoto supernatantu doporučujeme postupovat opatrně, aby nedošlo k nasátí buněčných zbytků.
3. Počáteční množství vzorku je příliš velké.
Nadměrné použití vzorku povede k neúplné fragmentaci vzorku nebo neúplné buněčné lýze pufrem PSL1, což má za následek zablokování purifikační kolony během purifikace.Plant Total RNA Isolation Kit Každý jednotlivý purifikovaný pracovní vzorek má 50 mg.Pro rostlinné vzorky polyolových polysacharidů doporučujeme vyzkoušet Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Teplota odstředivky je příliš nízká.
Celý proces izolace a čištění RNA se provádí při teplotě místnosti (20-25°C), kromě toho, že tkáň vzorku je rozbita kapalným dusíkem. Teplota některých kryogenních odstředivek je nižší než 20℃, což může způsobit zablokování kolony pro čištění DNA a/nebo kolony pouze pro RNA.Pokud k tomu dojde, nastavte teplotu centrifugy na 20-25℃, aujistěte se, že lyzační směs a/nebo supernatant s přidaným ethanolem byly předehřáté na 37 °C°C.
Žádná RNA extrahována nebo výtěžek RNA je nízký
Obvykle existuje mnoho faktorů, které ovlivňují účinnost regenerace, jako je: obsah RNA ve vzorku, operační metoda, eluční objem atd.
Analýza běžných příčin, jak je uvedeno níže:
1.Během operace byla provedena ledová lázeň nebo nízkoteplotní (4°C) centrifugace.
Doporučení: Pracujte při pokojové teplotě (15-25°C) v celém procesu neprovádějte ledovou lázeň a nízkoteplotní centrifugaci.
2. RNA byla degradována v důsledku nesprávné konzervace vzorku nebo dlouhodobé konzervace vzorku.
Doporučení: Čerstvě odebrané vzorky by měly být rychle zmraženy v kapalném dusíku a poté skladovány při -80°C po dlouhou dobu, vyhněte se opakovanému zmrazování a rozmrazování vzorků;nebo vzorky ihned namočte do roztoku stabilizátoru RNA RNAlater (vzorky zvířat).
3. Nedostatečná fragmentace vzorku a lýza vedou k zablokování purifikační kolony.
Návrh: Při mletí tkáně se prosím ujistěte, že je tkáň dostatečně rozemletá, a rychle ji přeneste do předem připraveného pufru PSL1 (ujistěte se, že byl přidán správný poměr β-ME, viz krok 1 postupu).
4. Eluent byl přidán nesprávně.
Návrh: Ujistěte se, že ddH2O bez RNázy je nakapáno do středu membrány čistící kolony.
5. Do pufru PSL2 nebo pufru PRW2 nebyl přidán správný objem absolutního etanolu.
Doporučení: Postupujte podle pokynů, přidejte správný objem absolutního etanolu do pufru PSL2 a pufru PRW2 a před použitím soupravy dobře promíchejte.
6. Množství vzorku tkáně je nevhodné.
Doporučení: Použijte 50 mg tkáně na 500 μl pufru PSL1.Použití příliš velkého množství tkáně sníží množství extrahované RNA a sníží se také čistota výsledné RNA.Důrazně doporučujeme, aby počáteční dávka vzorku nepřesáhla 50 mg na operaci extrakce RNA.
7.Nevhodný eluční objem nebo neúplná eluce.
Návrh: Objem eluentu v purifikační koloně je 50-200 μl;pokud není eluční efekt uspokojivý, doporučuje se prodloužit dobu při pokojové teplotě po přidání předehřáté ddH2O bez RNázy, např. 5-10 min.
8. Čistící kolona má po promytí pufrem PRW2 ethanolový zbytek.
Návrh: Pokud je prázdná zkumavka centrifugována po dobu 1 minuty a po promytí v pufru PRW2 stále zbývá ethanol, můžete prodloužit dobu centrifugace prázdné zkumavky na 2 minuty nebo umístit purifikační kolonu při pokojové teplotě na 5 minut, abyste zcela odstranili zbytkový etanol.
9.Sada byla nesprávně použita.
Návrh: U rostlinných vzorků polyfenolických polysacharidů nemusí být použití běžných souprav, jako je Plant Total RNA Isolation Kit, schopno získat ideální vzorky RNA.Doporučujeme vám použít Plant Total RNA IsolationKit Plus, který je speciálně navržen pro vzorky rostlin s polyfenolickými polysacharidy.Sada speciálně vyvinutá pro extrakci RNA z polyfenolových a polysacharidových rostlinných vzorků.
Hodnota OD260/OD280 je nízká
Eluce RNA pomocí ddH2O a použitá pro odečty spektrofotometrem vede k nízkým hodnotám OD260/OD280.Pro získání relativně správných hodnot OD260/OD280 doporučujeme použít 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (spíše než ddH2O bez RNázy), viz „Rozbory koncentrace a purifikace RNA“ na straně 19.
Purifikovaná RNA je degradována
Kvalita purifikované RNA souvisí s faktory, jako je uchování vzorku, kontaminace RNázou a manipulace.
Analýza běžných příčin:
1.Vzorky tkání nebyly po odběru včas skladovány.
Doporučení: Pokud vzorky tkáně po odběru nepoužijete včas, uložte je prosím ihned do tekutého dusíku při nízké teplotě nebo je po rychlém zmrazení v tekutém dusíku přeneste do -80°C k dlouhodobému skladování, případně vzorky ihned ponořte do roztoku stabilizátoru RNA RNAlater (vzorky zvířat ).Pro extrakci RNA zkuste použít čerstvě odebrané vzorky tkáně.
2.Opakované zmrazování a rozmrazování vzorků tkání.
Návrh: Při skladování vzorků tkáně je nejlepší je nařezat na malé kousky pro konzervaci a část z nich vyjmout při použití, aby nedošlo k degradaci RNA způsobené opakovaným zmrazováním a rozmrazováním vzorků.
3.Na operačním sále je zavedena RNáza nebo nenošené jednorázové rukavice, masky atd.
Návrh: Experimenty s extrakcí RNA se nejlépe provádějí v samostatných operacích s RNA a laboratorní stůl by měl být před experimentem vyčištěn a během experimentu by měly být používány jednorázové rukavice a masky, aby se v co největší míře zabránilo degradaci RNA způsobené zavedením RNázy.
4. Činidlo je během použití kontaminováno RNázou.
Návrh: Nahraďte novou sérií souprav pro extrakci celkové rostlinné RNA pro související experimenty.
5. Centrifugační zkumavky a špičky pipet používané pro manipulaci s RNA jsou kontaminovány RNázou.
Doporučení: Ujistěte se, že centrifugační zkumavky, špičky pipet, pipety atd. používané při extrakci RNA jsou bez RNázy.
Návody k použití:
Návod k použití Plant Total RNA Isolation Kit Plus
