Animal Total RNA Isolation Kit Soupravy pro celkovou extrakci a purifikaci RNA pro živočišné tkáně a buňky
Popis sady:
Rychle a efektivně extrahujte vysoce čistou a vysoce kvalitní celkovou RNA z různých živočišných tkání.
Není třeba se obávat degradace RNA.Celý systém je RNase-Free
Účinně odstraňte DNA pomocí DNA-Cleaning Column
Odstraňte DNA bez přidání DNázy
Jednoduché – všechny operace jsou dokončeny při pokojové teplotě
Rychlý – operace může být dokončena za 30 minut
Bezpečné – nepoužívá se žádné organické činidlo
Vysoká čistota — OD260/280≈1,8-2,1
Popisy sad
50 přípravků, 200 přípravků
Tato sada využíváspinový sloupec a vzorecvyvinutý naší společností, který dokáže extrahovat vysoce čistou a vysoce kvalitní celkovou RNA z různých živočišných tkání s vysokou účinností. Poskytuje účinnou kolonu pro čištění DNA, která dokáže snadno oddělit a adsorbovat genomovou DNA ze supernatantu a tkáňového lyzátu, jednoduchá a časově nenáročná;RNA-only Column dokáže účinně vázat RNA a může být zpracována současně s unikátním vzorcem Spousta vzorků.
Celý systém je bez RNázy, takže extrahovaná RNA není degradována;Buffer RW1, Buffer RW2 pufrovací systém, takže získaná RNA je bez znečištění proteiny, DNA, ionty a organickými sloučeninami.
Součásti stavebnice
| Animal Total RNA Isolation Kit | ||
| Součásti stavebnice | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 t | 200 T | |
| Vyrovnávací paměť RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Vyrovnávací paměť RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Vyrovnávací paměť RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Vyrovnávací paměť RW2 | 24 ml | 96 ml |
| DdH2O bez RNázy | 10 ml | 40 ml |
| Sloupec pouze RNA | 50 | 200 |
| Sloupec pro čištění DNA | 50 | 200 |
| Návod k použití | 1 kus | 1 kus |
Informace o produktu
| Formát | Otočný sloupec | Čistící složka | Foregenová kolona, činidlo |
| Flux | 1-24 vzorků | Čas na přípravu | ~30 min (24 vzorků) |
| Odstředivka | Stolní odstředivka | Pyrolýzní separace | Odstředivá separace |
| Vzorek | Živočišná tkáň;buňka | Množství vzorků | Tkáň:10-20 mg;Buňka: (1-5)×106 |
| Eluční objem | 50-200 μl | Maximální nakládací objem | 850 μl |
Vlastnosti a výhody
■ Není třeba se obávat degradace RNA;celý systém je RNase-Free
■ Účinně odstraňte DNA pomocí DNA-Cleaning Column
■ Odstraňte DNA bez přidání DNázy
■ Jednoduché všechny operace se provádějí při pokojové teplotě
■ Rychlý provoz lze dokončit za 30 minut
■ Bezpečné – není potřeba žádné organické činidlo
■ Vysoká čistota -OD260/280≈1,8-2,1
Aplikace sady
Je vhodný pro extrakci a purifikaci celkové RNA z různých čerstvých nebo zmrazených živočišných tkání nebo kultivovaných buněk.
Parametry produktu
■ Následné aplikace: syntéza prvního vlákna cDNA, RT-PCR, molekulární klonování, Northern Blot atd.
■ Vzorky: zvířecí tkáně, kultivované buňky
■ Dávkování: Tkáně 10-20 mg, buňky (2-5)×106
■ Maximální DNA vazebná kapacita purifikační kolony: 80 μg
■ Eluční objem: 50-200 μl
Diagram
Animal Total RNA Isolation Kit ošetřená 20 mg
Čerstvé vzorky myší, vezměte 5 % purifikované celkové RNA 1 % agaru
Glykogelová elektroforéza
1: Slezina 2: Ledviny
3: Játra 4: Srdce
Skladování a trvanlivost
Sada může být skladována po dobu 24 měsíců při pokojové teplotě (15–25 ℃) nebo 2–8 ℃ po delší dobu.Pufr RL1 lze po přidání β-merkaptoethanolu (volitelné) skladovat při 4 °C po dobu 1 měsíce.
Citované články
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., a kol.Lipidové nanočástice s nabitou mRNA pro úpravu jaterní báze prostřednictvím optimalizace centrálního kompozitního designu.Adv.Funct.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J a kol.Spontánní apoptóza buněk v terapeutickém přípravku kmenových buněk má imunomodulační účinky prostřednictvím uvolňování fosfatidylserinu.Signal Transduct Target Ther.14. července 2021; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17,97:Dai Z, Liu H, Liao J a kol.Modifikace tRNA N7-methylguanosinu zvyšuje onkogenní translaci mRNA a podporuje progresi intrahepatálního cholangiokarcinomu.Mol Cell.29. července 2021:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9,225:Cao X, Shu Y, Chen Y a kol.Modifikace m6A zprostředkovaná Mettl14 usnadňuje regeneraci jater udržováním homeostázy endoplazmatického retikula.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA izolační sady pro další ukázkové zdrojejsou dostupné:
Buněčné, rostlinné, virové, krevní atd.
RNA není extrahována nebo jsou výtěžky RNA nízké
Účinnost obnovy často ovlivňuje celá řada faktorů, jako je: obsah RNA ve vzorku tkáně, způsob operace, eluční objem atd.
1. Za provozu byla provedena ledová lázeň nebo kryogenní (4 °C) centrifugace.
Doporučení: Pracujte při pokojové teplotě (15-25 °C) po celou dobu procesu, nevytvářejte ledovou lázeň a odstřeďujte při nízkých teplotách.
2. Nesprávné uchování vzorku nebo příliš dlouhá doba skladování vzorku.
Doporučení: Vzorky skladujte při -80 °C nebo zmrazte v tekutém dusíku a vyhněte se opakovanému použití zmrazování a rozmrazování;zkuste pro extrakci RNA použít čerstvou tkáň nebo kultivované buňky.
3. Nedostatečná lýza vzorku.
Doporučení: Při homogenizaci tkáně zajistěte, aby byla tkáň dostatečně homogenizována a aby byly tkáňové buňky dostatečně rozštěpeny, aby se vysvětlilo uvolňování RNA.
4. Eluent není přidán správně.
Doporučení: Potvrďte, že RNase-Free ddH2O se přidává po kapkách do středu membrány čistící kolony.
5. Do pufru RL2 nebo pufru RW2 nebyl přidán správný objem absolutního ethanolu.
Doporučení: Postupujte podle pokynů, přidejte správný objem absolutního etanolu do pufru RL2 a pufru RW2 a před použitím soupravy dobře promíchejte.
6. Dávkování vzorku tkáně není vhodné.
Doporučení: Použijte 10-20 mg tkáně nebo (1-5) × 106buněk na 500 μl pufru RL1, protože nadměrné používání tkáně může mít za následek sníženou extrakci RNA.
7. Nesprávný eluční objem nebo neúplná eluce.
Doporučení: Eluční objem purifikační kolony je 50-200 μl;pokud není eluční efekt uspokojivý, doporučuje se prodloužit dobu umístění při pokojové teplotě po přidání předehřátého ddH bez RNázy2O, např. 5-10 min.
8. Čistící kolona obsahuje ethanolový zbytek po promytí pufrem RW2.
Doporučení: Pokud po promytí pufrem RW2 zůstanou zbytky ethanolu, centrifugujte prázdnou zkumavku po dobu 1 minuty, čas pro operaci centrifugace prázdné zkumavky lze prodloužit na 2 minuty nebo lze purifikační kolonu umístit na 5 minut při pokojové teplotě, aby se adekvátně odstranil zbytkový etanol.
Purifikovaná RNA je degradována
Kvalita purifikované RNA souvisí s faktory, jako je uchování vzorku, kontaminace RNázou a manipulace atd.
1. Vzorky tkání nejsou uchovávány včas.
Doporučení: Pokud vzorky tkáně nebo buňky nejsou použity včas po odběru, okamžitě je kryokonzervujte při -80 °C nebo tekutém dusíku.K extrakci RNA použijte, kdykoli je to možné, nově odebraný vzorek tkáně nebo buněk.
2. Opakované zmrazování a rozmrazování vzorků tkáně.
Doporučení: Při uchovávání vzorků tkáně je nejlepší je nařezat na malé kousky pro konzervaci a při použití jeden z kousků odstranit, aby se zabránilo opakovanému zmrazení a rozmrazení vzorku a degradaci RNA.
3. Během operace je zavedena RNáza nebo nenosí jednorázové rukavice, masky atd.
Doporučení: Experimenty s extrakcí RNA se nejlépe provádějí v oddělených místnostech pro manipulaci s RNA a před experimentem se stůl vyčistí.
Během experimentu používejte jednorázové rukavice a masky, abyste minimalizovali degradaci RNA způsobenou zavedením RNázy.
4. Reagencie jsou během použití kontaminovány RNázou.
Doporučení: Pro související experimenty vyměňte za novou sadu Animal Total RNA Isolation Kit.
5. Centrifugační zkumavky, špičky atd. používané při manipulaci s RNA jsou kontaminovány RNázou.
Doporučení: Ujistěte se, že centrifugační zkumavky, špičky, pipety atd. používané při extrakci RNA jsou bez RNázy.
Purifikovaná získaná RNA ovlivňuje následné experimenty
RNA purifikovaná na purifikační koloně, pokud jsou ionty solí, obsah proteinu příliš velký, ovlivní následný experiment, jako je: reverzní transkripce,Northern Blot et al.
1. Eluovaná RNA má zbytky solí.
Doporučení: Ujistěte se, že byl do pufru RW2 přidán správný objem ethanolu a proveďte 2 promytí kolony pro čištění při rychlosti odstředění uvedené pro provoz;pokud tam jsou nějaké zbytky iontů soli, ponechte purifikační kolonu pufru RW2 po dobu 5 minut při pokojové teplotě a proveďte centrifugaci, abyste maximalizovali odstranění kontaminace solí.
2. Ethanolový zbytek v eluované RNA.
Doporučení: Potvrďte, že po promytí pufrem RW2 proveďte centrifugaci prázdné zkumavky rychlostí centrifugace uvedenou pro provoz, zvyšte dobu centrifugace prázdné zkumavky na 2 minuty, pokud jsou v ní ještě zbytky ethanolu, nebo ji po centrifugaci prázdné zkumavky nechte 5 minut při pokojové teplotě, abyste maximalizovali odstranění zbytků ethanolu.
