Souprava Cell Direct RT qPCR—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Jednokrokové soupravy qRT-PCR Sonda
Popisy
Tento produkt používá jedinečný systém lyzačního pufru k rychlému uvolnění RNA z kultivovaných buněčných vzorků pro reakce RT-qPCR, čímž se eliminuje časově náročný a pracný proces čištění RNA a pouze 7 minut k získání požadovaného templátu RNA, s 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman poskytovanými soupravou může rychle a efektivně získat kvantitativní výsledky PCR v reálném čase.
5× Direct RT Mix a 2× Direct qPCR Mix-Taqman mají silnou toleranci inhibitoru a mohou provádět účinnou reverzní a specifickou amplifikaci pomocí lyzátu vzorku, který má být měřen, jako templátu.Činidlo obsahuje Foregene reverzní transkriptázu, Hot D-Taq DNA polymerázu, dNTPs, MgCl2, reakční pufr, PCR Optimizer a stabilizátor, který lze použít s lyzačním pufrem k rychlé a snadné detekci vzorků a má vlastnosti vysoké citlivosti, specificity a stability.
Specifikace
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Součásti stavebnice
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Součásti stavebnice 20μl qPCR reakční systém | DRT-01021 | DRT-01022 | Poznámka | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Část I | Buffer CL | 4 ml | 20 ml | Buněčná lýza |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Část II | DNA Eraser | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20× referenční barvivo ROX | 40 μl | 200 μl | ||
| ddH bez RNázy2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Návod k použití | 1 kus | 1 kus | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman lze zakoupit samostatně
Vlastnosti a výhody
■Jednoduché a efektivní: s technologií Cell Direct RT lze vzorky RNA získat za pouhých 7 minut.
■ Potřeba vzorku je malá, lze testovat pouze 10 buněk.
■ Vysoká propustnost: dokáže rychle detekovat RNA v buňkách kultivovaných na 384, 96, 24, 12, 6-jamkových destičkách.
■ DNA Eraser může rychle odstranit uvolněné genomy a výrazně snížit dopad na následné výsledky experimentů.
■ Optimalizovaný systém RT a qPCR činí dvoukrokovou reverzní transkripci RT-PCR účinnější a PCR specifičtější a odolnější vůči inhibitorům reakce RT-qPCR.
Aplikace sady
Oblast použití: kultivované buňky.
- RNA uvolněná lýzou vzorku: použitelná pouze pro RT-qPCR templát této soupravy.
- Soupravu lze použít pro následující účely: analýza genové exprese, ověření účinku umlčování genů zprostředkovaného siRNA, screening léků atd.
Skladování a trvanlivost
Část I této sady by měla být uložena ve 4℃;Část II by měla být skladována při -20 °C.
Foregene Protease Plus II by měl být skladován při 4℃, nezmrazujte při -20 ℃.
Činidlo 2×Direct qPCR Mix-Taqman by měl být skladován při -20℃ve tmě;při častém používání může být také uložen na 4℃ pro krátkodobé skladování (spotřebujte do 10 dnů).
Principy návrhu primerů PCR v reálném čase
Forward Primer a Reverse Primer
Pro Real Time PCR je velmi důležitý návrh primeru.Primery souvisejí se specificitou a účinností PCR amplifikace a mohou být navrženy s ohledem na následující principy:
- Délka primeru: 18-30 bp.
- Obsah GC: 40-60 %.
- Hodnota Tm: Software pro návrh primeru, jako je Primer 5, může poskytnout hodnotu Tm primeru.Hodnoty Tm upstream a downstream primerů by měly být co nejblíže.Lze také použít vzorec pro výpočet Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Při provádění PCR se jako teplota nasedání obecně volí teplota pod hodnotou Tm primeru 5 °C (odpovídající zvýšení teploty nasedání může zvýšit specifitu PCR reakce).
- Primery a produkty PCR:
- Délka amplifikačního produktu PCR návrhu primeru je výhodně 100-150 bp.
- Navrhované primery v sekundární strukturální oblasti templátu by se měly co nejvíce vyhnout.
- Vyhněte se tvorbě 2 nebo více komplementárních bází mezi 3' konci upstream a downstream primerů.
- Základní 3′ terminálová základna nemůže být přítomna se 3 dalšími po sobě jdoucími G nebo C.
- Primery samotné nemohou mít komplementární struktury, jinak se vytvoří vlásenková struktura ovlivňující PCR amplifikaci.
- ATCG by mělo být distribuováno co nejrovnoměrněji v sekvenci primeru a 3' terminální báze by měla být vyloučena jako T.
slepé střevo1: Cell DirectRT-qPCR Součást stavebnicet balíček doplňků
1. Roztok pro lýzu buněk
| Roztok pro buněčnou lýzu | |||
| Součásti stavebnice (24-jamkový lyzační systém / jamka) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Částjá | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ČástII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Součásti stavebnice (20 μl reakčního systému) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH bez RNázy2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR mix | ||
| Součásti stavebnice (20 μl reakčního systému) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× referenční barvivo ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH bez RNázy2O | 1,7 ml | 10 ml |
Návody k použití:
