(96jamková) Kit QuickEasy Cell Direct RT-qPCR – Taqman
Popisy
The(96 jamek) QuickEasyTM Souprava Cell Direct RT-qPCR–Taqmanposkytujeunikátní systém lyzačního pufruto rychle uvolnit RNAz kultivované buňkyvzorky pro reakce RT-qPCR, což eliminuje časovou náročnost a pracnostProces čištění RNA a získání požadovaného templátu RNA trvá pouze 7 minut.The5× Direct RT Mixa2× Direct qPCR Mix-SYBRdodávané v krabici lze rychle aefektivně získat kvantitativní údaje v reálném časeVýsledky PCR.
5× Direct RT Mix a 2× Direct qPCR Mix-Taqman mají silnou toleranci inhibitorů a mohou použít lyzát vzorku, který má být testován, jako templát pro účinnou reverzní transkripci a specifickou amplifikaci.Činidlo obsahuje unikátní reverzní transkriptázu Foregene s vysokou afinitou k RNA a také Hot D-Taq DNA polymerázu, dNTPs, MgCl2 , reakční pufr, PCR optimalizátor a stabilizátor, a může být použit ve spojení s lyzačním pufrem k rychlé, snadné a přesné detekci vzorku a má vlastnosti vysoké citlivosti, silné specificity a dobré stability.
Souprava je zaměřena na lýzu mikrosystému 96-jamkových kultivovaných buněk a má dobrou uniformitu a konzistenci;součásti soupravy poskytují 96 lýzových reakcí, 96 reverzních transkripčních reakcí a 96×2 qPCR reakcí, které mohou splnit 96jamkovou destičku s buňkami pro jednorázové použití, čímž se zabrání znečištění způsobenému opakovaným otevíráním, zmrazováním a rozmrazováním reagencií a degradaci účinnosti reagencií.
Součásti stavebnice
| Složení soupravy ( 50 μL lýzový systém/20 μlRT reakční systém /20μL qPCR reakční systém) | DRT-03021 | Poznámka | |
| 96T | |||
| ČástI | BufferCL | 5 ml | BuňkaLysis |
| ForegeneProteáza Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Část II | DNAGuma | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× referenční barvivo ROX | 400ul | ||
| RNáza- Volný, uvolnitddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mroční | 1 kus | 1 porce | |
*: Lyzační činidlo DNA Eraser je součástí části II soupravy;Komponenty Cell Lysis, RT a qPCR lze zakoupit samostatně.
Vlastnosti a výhody
■Jednoduché a efektivní: s technologií Cell Direct RT lze vzorky RNA získat za pouhých 7 minut.
■ Potřeba vzorku je malá, lze testovat pouze 10 buněk.
■ Vysoká propustnost: dokáže rychle detekovat RNA v buňkách kultivovaných na 384, 96, 24, 12, 6-jamkových destičkách.
■ DNA Eraser může rychle odstranit uvolněné genomy a výrazně snížit dopad na následné výsledky experimentů.
■ Optimalizovaný systém RT a qPCR činí dvoukrokovou reverzní transkripci RT-PCR účinnější a PCR specifičtější a odolnější vůči inhibitorům reakce RT-qPCR.
Aplikace sady
Oblast použití: kultivované buňky.
- RNA uvolněná lýzou vzorku: použitelná pouze pro RT-qPCR templát této soupravy.
- Soupravu lze použít pro následující účely: analýza genové exprese, ověření účinku umlčování genů zprostředkovaného siRNA, screening léků atd.
Skladování a trvanlivost
Část I této sady by měla být uložena ve 4℃;Část II by měla být skladována při -20 °C.
Foregene Protease Plus II by měl být skladován při 4℃, nezmrazujte při -20 ℃.
Činidlo 2×Direct qPCR Mix-Taqman by měl být skladován při -20℃ve tmě;při častém používání může být také uložen na 4℃ pro krátkodobé skladování (spotřebujte do 10 dnů).
Principy návrhu primerů PCR v reálném čase
Forward Primer a Reverse Primer
Pro Real Time PCR je velmi důležitý návrh primeru.Primery souvisejí se specificitou a účinností PCR amplifikace a mohou být navrženy s ohledem na následující principy:
- Délka primeru: 18-30 bp.
- Obsah GC: 40-60 %.
- Hodnota Tm: Software pro návrh primeru, jako je Primer 5, může poskytnout hodnotu Tm primeru.Hodnoty Tm upstream a downstream primerů by měly být co nejblíže.Lze také použít vzorec pro výpočet Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Při provádění PCR se jako teplota nasedání obecně volí teplota pod hodnotou Tm primeru 5 °C (odpovídající zvýšení teploty nasedání může zvýšit specifitu PCR reakce).
- Primery a produkty PCR:
- Délka amplifikačního produktu PCR návrhu primeru je výhodně 100-150 bp.
- Navrhované primery v sekundární strukturální oblasti templátu by se měly co nejvíce vyhnout.
- Vyhněte se tvorbě 2 nebo více komplementárních bází mezi 3' konci upstream a downstream primerů.
- Základní 3′ terminálová základna nemůže být přítomna se 3 dalšími po sobě jdoucími G nebo C.
- Primery samotné nemohou mít komplementární struktury, jinak se vytvoří vlásenková struktura ovlivňující PCR amplifikaci.
- ATCG by mělo být distribuováno co nejrovnoměrněji v sekvenci primeru a 3' terminální báze by měla být vyloučena jako T.
slepé střevo1: Cell DirectRT-qPCR Součást stavebnicet balíček doplňků
1. Roztok pro lýzu buněk
| Roztok pro buněčnou lýzu | |||
| Součásti stavebnice (24-jamkový lyzační systém / jamka) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Částjá | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ČástII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Součásti stavebnice (20 μl reakčního systému) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH bez RNázy2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR mix | ||
| Součásti stavebnice (20 μl reakčního systému) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× referenční barvivo ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH bez RNázy2O | 1,7 ml | 10 ml |
Návody k použití:
