Nízký poměr A260/A230 je obvykle způsoben nečistotami s maximální vlnovou délkou absorpce při 230 nm.Podívejme se, co tyto nečistoty zahrnují:

• Běžné znečišťující látky	Absorpční vlnová délka	Poměrový efekt
  Protein	~230nm a 280nm	Současné snížení A260/A 280a A260/A 280poměry
  Guanidinová sůl	220-240 nm	Snižte A260/A 280poměr
  fenol	~270 nm	-
  Trizol	~230nm a 270nm	Snižte A260/A 280poměr
  EDTA	~230 nm	Snižte A260/A 280poměr
  Ethanol	230-240 nm	Snižte A260/A 280poměr

 
 
 
Vlnová délka absorpce a hodnota kontrastu běžných polutantů

Pkontaminace proteiny
Znečištění proteiny lze považovat za nejčastější znečištění v procesu extrakce nukleových kyselin.Protein existuje mezi horní vodnou fází a spodníorganickéfáze .Znečištění sníží poměr A260/A280 a A260/A230 současně a poměr A260/A230 se bude měnit zřetelněji než poměr A260/A280.
Během následnéhoreverzní transkripceor qPCR reakce, proteinové zbytky mohou inhibovat nebo interferovat s funkcí enzymu.Nejlepší způsob, jak se vyhnout kontaminaci proteiny, je mít při odsávání supernatantu na paměti zásadu „spíše méně než více, vícekrát malé množství“.

2. Znečištění guanidiniem
hydrochlorid (GuHCl) a guanidinthiokyanát (GTC) mají účinek denaturace proteinů, které mohou rychle zničit buněčné membrány během procesu extrakce nukleových kyselin, což způsobí denaturaci proteinů a srážení.Absorpční vlnová délka GuHCl a GTC je mezi 220-240 nm, azbytková guanidiniová sůl sníží poměr A260/A230.Přestože zbytková guanidiniová sůl sníží poměr,dopad na následné experimenty je ve skutečnosti zanedbatelný.

3. Kontaminace trizolem
Hlavní složkou Trizolu je fenol .Hlavní funkcí fenolu je lýza buněk a uvolňování proteinů a látek nukleových kyselin v buňkách.Ačkoli fenol může účinně denaturovat proteiny, nemůže zcela inhibovat aktivitu RNázy.Proto se k TRIzolu přidávají 8-hydroxychinolin, guanidinisothiokyanát, β-merkaptoethanol atd. k inhibici endogenní a exogenní RNázy.
Při extrakci buněčné RNA může Trizol rychle lyzovat buňky a inhibovat nukleázu uvolněnou z buněk a zbytkový Trizol významně sníží poměr A260/A230.
Způsob zpracování: Při odstřeďování je třeba poznamenat, že fenol v Trizolu je snadno rozpustný ve vodní fázi za podmínek 4° a pokojové teploty.

4. Ethanolový zbytek
Ethanol se používá v konečném procesu k vysrážení DNA při současném rozpouštění iontů solí, které mohou být navázány na DNA.Vlnová délka absorpce nejvyššíabsorpční vrcholethanol je také na 230-240 nm, cožsníží také poměr A260/A230.
Metodu zabránění ethanolovému zbytku lze během konečné eluce opakovat dvakrát, foukáním dovnitřdigestořpo dobu dvou minut, aby se ethanol zcela odpařil před přidáním pufru pro eluci.
Je však třeba vědět, že poměr je pouze hodnotícím indexem kvality RNA.Pokud jsou výše uvedené operace přísně regulovány, nebude mít odchylka mezi poměrem a standardním rozsahem velký dopad na následné experimenty.
Související produkty:
Kit pro izolaci zvířecí celkové RNA
Plant Total RNA Isolation kit
Souprava pro izolaci buněčné celkové RNA
Plant Total RNA Isolation kit Plus