Buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit Souprava pro extrakci nebo purifikaci genomové DNA z bukálních stěrů
Popis sady:
Rychle vyčistěte vysoce kvalitní genomickou DNA ze vzorků bukálního výtěru/FTA karty.
◮Žádná kontaminace RNázou:DNA-Only Column, který je součástí sady, umožňuje odstranit RNA z genomové DNA bez přidání RNázy během experimentu, čímž se zabrání kontaminaci laboratoře exogenní RNázou.
◮Vysoká rychlost:Foregene Protease má vyšší aktivitu než podobné proteázy a rychle tráví vzorky tkáně;operace je jednoduchá a operace extrakce genomové DNA může být dokončena během 20-80 minut.
◮Pohodlné:Centrifugace se provádí při pokojové teplotě a není potřeba nízkoteplotní centrifugace při 4 °C nebo srážení DNA ethanolem.
◮Bezpečnost:Není nutná žádná extrakce organickým činidlem.
◮Vysoká kvalita:Extrahovaná genomová DNA má velké fragmenty, žádnou RNA, žádnou RNázu a extrémně nízký obsah iontů, což může splnit požadavky různých experimentů.
◮Mikroeluční systém:Může zvýšit koncentraci genomové DNA, což je vhodné pro následnou detekci nebo experiment.
Popis
Tato souprava poskytuje účinnou a rychlou metodu pro získání vysoce koncentrované genomové DNA z bukálních výtěrů a FTA karty (krevní skvrny).Pomocí naší společnosti'Jedinečná kolona a vzorec křemičité membrány obsahující pouze DNA, v kombinaci s Foregene Proteázou, vysoce koncentrovaná, vysoce kvalitní genomická DNA může být extrahována za 80 minut.Speciálně navržená malá purifikační kolona váže genomovou DNA a DNA může být eluována malým množstvím (15μl) eluční systém pro zvýšení koncentrace získané genomové DNA, který je vhodný pro následnou detekci nebo experiment.Souprava může zpracovávat jeden nebo více vzorků najednou a proces čištění nevyžaduje extrakci organických látek jako je fenol, chloroform a časově náročné srážení isopropanolem nebo ethanolem a operace je jednoduchá a časově nenáročná.
Specifikace
50 příprav
Součásti stavebnice
| Vyrovnávací paměť ST1 |
| Vyrovnávací paměť ST2 |
| Lineární akrylamid |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregenová proteáza |
| Sloupec pouze pro DNA |
| Instrukce |
Vlastnosti a výhody
-Žádná kontaminace RNázou: Sloupec pouze pro DNA, který je součástí sady, umožňuje odstranit RNA z genomové DNA bez přidání RNázy během experimentu, čímž se zabrání kontaminaci laboratoře exogenní RNázou.
-Vysoká rychlost: Foregene Protease má vyšší aktivitu než podobné proteázy, rychle tráví vzorky;jednoduchá obsluha.
-Pohodlné: Centrifugace se provádí při pokojové teplotě a není potřeba nízkoteplotní centrifugace při 4 °C nebo srážení DNA ethanolem.
-Bezpečnost: Není nutná žádná extrakce organických činidel.
-Vysoká kvalita: Extrahovaná genomová DNA má velké fragmenty, žádnou RNA, žádnou RNázu a extrémně nízký obsah iontů, což může splnit požadavky různých experimentů.
-Mikroeluční systém: Může zvýšit koncentraci genomové DNA, což je vhodné pro následnou detekci nebo experiment.
Aplikace sady
Je vhodný pro purifikaci genomové DNA z následujících vzorků: bukální výtěry, FTA Card (krevní skvrny).
Skladování a trvanlivost
-Tato sada může být skladována po dobu 12 měsíců v suchu při pokojové teplotě (15-25°C);pokud je třeba skladovat delší dobu, lze jej skladovat při 2-8°C.
Poznámka: Při skladování při nízké teplotě je roztok náchylný ke srážení.Před použitím se ujistěte, že jste roztok umístili do soupravy na určitou dobu při pokojové teplotě.V případě potřeby jej předehřejte ve vodní lázni na 37 °C po dobu 10 minut, aby se sraženina rozpustila, a před použitím promíchejte.
-Foregene Protease roztok má unikátní vzorec, který je aktivní při dlouhodobém skladování při pokojové teplotě (3 měsíce);jeho aktivita a stabilita bude lepší při skladování při 4°C, proto se doporučuje skladovat při 4°C, pamatujte, že jej neuchovávejte při -20°C.
Čistící kolona je ucpaná
V této soupravě je při operaci extrakce genomové DNA purifikační kolona přímo adsorbována na směs enzymatické lýzy vzorku bez kroku centrifugace a purifikační kolona může být zablokována v důsledku neúplné enzymizace a vysoké viskozity vzorku.
Možné příčiny jsou následující:
1. Neúplné enzymatické štěpení vzorků tkáně.
Doporučení: Dobu zpracování vzorku Foregene Protease lze vhodně prodloužit nebo lze supernatant odebrat po centrifugaci při 12 000 ot./min (~13 400 × g) po dobu 5 minut.
2. Nadměrné používání vzorků tkání nebo velkých tkání.
Doporučení: Nejlepší je nepřekročit 1 bukální výtěr ve vzorku;pokud je vzorek příliš velký, zvyšte odpovídajícím způsobem dávku pufru ST1, foregenové proteázy, pufru ST2.
3. Viskozita vzorku je příliš vysoká.
Doporučení: Vzorky lze před extrakcí genomové DNA vhodně naředit 10 mM Tris-HCl.
4. Fragmenty krevní karty byly odsáty.
Doporučení: Doba přechodné centrifugace v kroku 6 extrakce genomu krevní skvrny (FTA Card) může být vhodně prodloužena.
Nízký výtěžek nebo žádná DNA
Často existuje řada faktorů, které ovlivňují výtěžek genomové DNA, včetně původu vzorku, podmínek uchovávání vzorku, přípravy vzorku, manipulace atd.
Během extrakce nelze získat genomovou DNA
Možné příčiny jsou následující:
1. Nesprávné uchování vzorků nebo příliš dlouhé skladování vede k degradaci genomové DNA.
Doporučení: Výtěry z úst by měly být pokud možno čerstvě odebrány a není vhodné používat konzervované výtěry pro operace extrakce genomové DNA;vzorky krevních skvrn by měly zajistit, že kvalita je kvalifikovaná a doba skladování by neměla být příliš dlouhá.
2. Příliš malé využití tkáně nemusí mít za následek žádnou extrakci odpovídající genomové DNA.
Doporučení: Postupujte podle pokynů k odběru vzorků bukálního výtěru v provozní příručce a otřete je tolikrát, kolikrát je to možné, aby bylo možné k ústnímu výtěru připojit dostatek buněk pro extrakci genomové DNA;pro extrakci vzorku krevních skvrn může být plocha řezání krevních skvrn vhodně zvětšena.
3. Foregenová proteáza je nesprávně konzervována, což má za následek snížení její aktivity nebo inaktivaci.
Doporučení: Pro enzymatickou reakci potvrďte podmínky skladování Foregene proteázy nebo ji vyměňte za novou Foregene proteázu.
4. Nesprávná konzervace soupravy nebo doba skladování je příliš dlouhá, což má za následek selhání některých součástí soupravy.
Doporučení: Kupte si novou soupravu pro izolaci DNA bukálních výtěrů pro související postupy.
5. Buffer WB nepřidává absolutní etanol.
Doporučení: Ujistěte se, že pufr WB přidává správný objem absolutního etanolu.
6. Eluent není správně přidán do silikonového filmu.
Doporučení: Přidejte na 65 °C předehřáté kapky eluentu doprostřed silikonové membrány a nechte 5 minut při pokojové teplotě, aby se zvýšila účinnost eluce.
Izolovaná genomová DNA s nízkým výtěžkem
Možné příčiny jsou následující:
1. Nesprávné uchování vzorků nebo příliš dlouhé skladování vede k degradaci genomové DNA.
Doporučení: Orální výtěry se přednostně odebírají čerstvě a konzervované výtěry by se neměly používat pro extrakci genomové DNA.
2. Pokud je množství vzorku tkáně příliš malé, obsah extrahované genomové DNA bude nižší.
Doporučení: Postupujte podle pokynů k odběru vzorků ústního výtěru v provozní příručce a otřete je tolikrát, kolikrát je to možné, aby bylo možné k ústnímu výtěru připojit dostatek buněk pro extrakci genomové DNA.
3. Foregenová proteáza je nesprávně konzervována, což má za následek snížení její aktivity nebo inaktivaci.
Doporučení: Pro enzymatickou reakci potvrďte podmínky skladování Foregene proteázy nebo ji vyměňte za novou Foregene proteázu.
4. Problémy s eluenty.
Doporučení: Pro eluci použijte pufr EB;pokud používáte ddH2O nebo jiných eluentech, potvrďte, že pH eluátu je mezi 7,0-8,5.
5. Eluát není správně přidáván po kapkách.
Doporučení: Přidejte kapky eluentu doprostřed silikonové membrány a nechte 5 minut při pokojové teplotě pro zvýšení účinnosti eluce.
6. Eluční kapalina se hromadí příliš málo.
Doporučení: Použijte eluent pro eluci genomové DNA, jak je požadováno v pokynech, alespoň ne méně než 15 μl.
Izolovaná genomová DNA s nízkou čistotou
Nízká čistota genomové DNA může vést k selhání nebo neuspokojivým výsledkům následných experimentů, jako jsou: enzymy nelze rozříznout, PCR nemůže získat požadovaný genový fragment atd.
Možné příčiny jsou následující:
1. Heteroproteinové znečištění, znečištění RNA.
Analýza: Purifikační kolona nebyla promyta pomocí pufru PW;promývací purifikační kolona Buffer PW nebyla promyta správnou rychlostí odstředění.
Doporučení: Před přidáním ethanolu se ujistěte, že v supernatantu není žádná sraženina;ujistěte se, že čistící kolonu promyjete podle návodu a tento krok nelze vynechat.
2. Znečištění ionty nečistot.
Analýza: Promývací purifikační kolona pufru WB byla vynechána nebo promyta pouze jednou, což vedlo ke zbytkové iontové kontaminaci.
Doporučení: Buffer WB promyjte 2x podle pokynů, abyste co nejvíce odstranili zbytkové ionty.
3. Kontaminace RNA enzymem.
Analýza: Cizí RNázy byly přidány do pufru;Operace promývání pufrem PW byla nesprávná, což vedlo ke zbytkům RNázy, ovlivňujícím následné experimentální operace RNA, jako je in vitro transkripce.
Doporučení: Soupravy pro izolaci nukleových kyselin řady Foregene mohou odstranit RNA bez dodatečného přidání RNázy, takže sada bukálních výtěrů/FTA Card DNA Isolation Kit nemusí přidávat RNázu;určitě dodržujte pokyny pro promývací purifikační kolonu Buffer PW a tento krok nelze vynechat.
4. Ethanolový zbytek.
Analýza: Buffer WB neprovedl centrifugaci prázdné zkumavky po promytí purifikační kolony.
Doporučení: Proveďte správnou operaci centrifugace prázdné zkumavky podle pokynů.
5. Jiné znečištění nečistotami.
Analýza: Uložené vzorky nebo speciální vzorky nejsou předem upraveny.
Doporučení: Důkladně předem ošetřete vzorek podle návodu.
