Souprava pro izolaci krevní RNA
Popis sady:
Kat.č.RE-04011/04013
Pro celkovou purifikaci RNA z plné krve 104 ≤ bílé krvinky ≤ 107
Rychle izolujte a vyčistěte krevní RNA z bílých krvinek.
-Není třeba se obávat degradace RNA.Celá sada je bez RNázy
-Jednoduché – všechny operace jsou dokončeny při pokojové teplotě
-Rychlý—operaci lze dokončit za 20 minut
-Vysoký výtěžek RNA: Sloupec pouze RNA a jedinečný vzorec mohou účinně čistit RNA
-Bezpečné – nepoužívá se žádné organické činidlo
-Velká kapacita zpracování vzorků – pokaždé lze zpracovat až 200 μl vzorků.
-Vysoká kvalita – purifikovaná RNA je vysoce čistá, bez proteinů a jiných nečistot a může splňovat různé následné experimentální aplikace.
Popisy
Souprava využívá rotační kolonu a formuli vyvinutou naší společností, která dokáže účinně extrahovat vysoce čistou a vysoce kvalitní celkovou RNA z antikoagulované plné krve.Souprava poskytuje lyzát červených krvinek (Buffer RCL), který dokáže rychle a efektivně lyzovat červené krvinky a zadržet bílé krvinky.Účinná kolona pro čištění DNA může snadno oddělit supernatant a buněčné lyzáty a adsorbovat a odstranit genomovou DNA.Obsluha je jednoduchá a časově nenáročná;RNA-only Column dokáže účinně vázat RNA a díky jedinečnému vzorci dokáže zpracovat velké množství vzorků současně.
Celý systém bez RNázy činí extrahovanou RNA nedegradovatelnou;Buffer RW1 a Buffer RW2 pufr promývací systém činí získanou RNA bez znečištění proteiny, DNA, ionty a organickými sloučeninami.
Obsah sady
| Souprava pro izolaci celkové RNA krve | ||
| Složení soupravy | RE-04011 | RE-04013 |
| 50krát | 200krát | |
| Vyrovnávací paměť RCL (10×) | 52,5 ml | 210 ml |
| Vyrovnávací paměť BRL1* | 30 ml | 120 ml |
| Vyrovnávací paměť BRL2 | 18 ml | 66 ml |
| Vyrovnávací paměť RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Vyrovnávací paměť RW2 | 24 ml | 96 ml |
| ddH bez RNázy2 O | 10 ml | 40 ml |
| Sloupec pouze RNA | 50 sad | 200 sad |
| Sloupec pro čištění DNA | 50 sad | 200 sad |
| manuál | 1 kopie | 1 kopie |
Vlastnosti a výhody
-Není třeba se obávat degradace RNA.Celá sada je bez RNázy.
-Jednoduché – všechny operace jsou dokončeny při pokojové teplotě.
-Rychlý—operaci lze dokončit za 20 minut.
-Vysoký výtěžek RNA: Sloupec pouze pro RNA a jedinečný vzorec mohou účinně čistit RNA.
-Bezpečné – nepoužívá se žádné organické činidlo.
-Velká kapacita zpracování vzorků – pokaždé lze zpracovat až 200 μl vzorků.
-Vysoká kvalita – purifikovaná RNA je vysoce čistá, bez proteinů a jiných nečistot a může splňovat různé následné experimentální aplikace.
Parametry stavebnice
Aplikace sady:
Je vhodný pro extrakci a purifikaci celkové RNA z plné krve savců.
Pracovní postup
Podmínky skladování
Buffer RCL (10×) by měl být skladován při 2-8 ℃ ;ostatní součásti soupravy mohou být skladovány při pokojové teplotě (15-25 ℃) v suchu a mohou být skladovány po dobu 12 měsíců.Pufr BRL1 může být skladován při 4 °C po dobu 1 měsíce po přidání β-merkaptoethanolu (volitelně).
Poznámka: Při skladování při nízké teplotě je roztok náchylný ke srážení.Před použitím se ujistěte, že jste roztok umístili do soupravy při pokojové teplotě na určitou dobu.V případě potřeby jej předehřejte ve vodní lázni na 37 °C po dobu 10 minut, aby se sraženina rozpustila, a před použitím dobře promíchejte.
Příručky pro analýzu problémů
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Nelze extrahovat žádnou RNA nebo je výtěžek nukleové kyseliny nízký
Obvykle existuje mnoho faktorů, které ovlivňují efektivitu regenerace, jako například: obsah RNA vzorku, způsob operace, eluční objem atd.
Analýza běžných příčin:
1. Ledová lázeň nebo nízkoteplotní (4 °C) centrifugace za provozu.
Doporučení: Provoz při pokojové teplotě (15-25 °C), nikdy ledová lázeň a nízkoteplotní odstředivka.
2. Nesprávné skladování vzorků nebo příliš dlouhé skladování vzorků.
Doporučení: Vzorky skladujte při -80 °C nebo zmrazte v tekutém dusíku a vyhněte se opakovanému použití zmrazování a rozmrazování;zkuste použít čerstvě odebrané vzorky pro extrakci RNA.
3. Nedostatečná lýza vzorku
Doporučení: Ujistěte se, že vzorek a pracovní roztok (lineární akrylamid) byly důkladně promíchány a inkubovány po dobu 10 minut při pokojové teplotě (15-25 °C)
4. Eluent byl přidán nesprávně
Doporučení: Ujistěte se, že ddH2O bez RNázy je přidána do středu membrány čistící kolony
5. Nesprávný objem bezvodého ethanolu v pufru viRW2
Doporučení: Postupujte podle pokynů, přidejte správný objem bezvodého etanolu do pufru viRW2 a před použitím sady je dobře promíchejte.
6. Nesprávné použití vzorku.
Návrh: 200 µl vzorku na 500 µl pufru viRL.Nadměrný objem vzorku povede ke snížení rychlosti extrakce RNA.
7. Nesprávný eluční objem nebo neúplná eluce.
Návrh: Objem eluentu v purifikační koloně je 30-50 μl;pokud není eluční efekt uspokojivý, doporučuje se přidat předehřátý ddH bez RNázy2O a prodlužte dobu umístění při pokojové teplotě, např. 5-10 min
8. Purifikační kolona obsahuje ethanolový zbytek po propláchnutí v pufru viRW2.
Návrh: Pokud po propláchnutí v pufru viRW2 a centrifugaci v prázdné zkumavce po dobu 2 minut stále zůstává ethanol, lze purifikační kolonu po centrifugaci v prázdné zkumavce nechat 5 minut při pokojové teplotě, aby se zcela odstranil zbývající etanol.
Degradace purifikovaných molekul RNA
Kvalita purifikované RNA souvisí s faktory, jako je skladování vzorku, kontaminace RNázou a provoz.
Analýza běžných příčin:
1. Odebrané vzorky nebyly včas uloženy.
Doporučení: Pokud vzorek po odběru nepoužijete včas, ihned jej uložte při teplotě -80 ℃ nebo kapalném dusíku.Pro extrakci molekul RNA se snažte použít čerstvě odebrané vzorky, kdykoli je to možné.
2. Odebrané vzorky opakovaně zmrazovaly a rozmrazovaly.
Doporučení: Během odběru a skladování vzorků se vyvarujte opakovaného zmrazování a rozmrazování (ne více než jednou), jinak se sníží výtěžek nukleové kyseliny.
3.Na operačním sále byla zavedena RNáza nebo nebyly nošeny jednorázové rukavice, masky atd.
Návrh: Experiment s extrakcí molekul RNA se nejlépe provádí v samostatné operační místnosti RNA a před experimentem se experimentální stůl vyčistí.Během experimentu používejte jednorázové rukavice a masky, abyste zabránili degradaci RNA způsobené zavedením RNázy.
4. Činidlo je během použití kontaminováno RNázou.
Návrh: Vyměňte za novou sadu pro izolaci virové RNA pro související experimenty.
5. Kontaminace centrifugačních zkumavek, špiček pipet atd. RNázou. Doporučení: Ujistěte se, že všechny centrifugační zkumavky, špičky a pipety neobsahují RNázu.
Purifikované molekuly RNA ovlivnily následné experimenty
Molekuly RNA purifikované purifikační kolonou ovlivní následné experimenty, pokud je příliš mnoho solných iontů nebo proteinů, jako jsou: reverzní transkripce, Northern Blot atd.
1.V eluovaných molekulách RNA jsou zbývající ionty solí.
Doporučení: Ujistěte se, že do pufru viRW2 byl přidán správný objem bezvodého etanolu a promyjte purifikační kolonu dvakrát podle správné rychlosti odstřeďování v návodu k obsluze；Pokud stále zbývají ionty solí, můžete do purifikační kolony přidat pufr viRW2 a nechat jej při pokojové teplotě po dobu 5 minut.Poté proveďte centrifugaci, abyste co nejvíce odstranili kontaminaci solnými ionty
2. V eluovaných molekulách RNA je zbývající ethanol
Návrh: jakmile potvrdíte, že purifikační kolony byly propláchnuty pufrem viRW2, proveďte centrifugaci v prázdné zkumavce podle odstředivé rychlosti v návodu k obsluze.Pokud stále zbývá ethanol, lze jej po centrifugaci v prázdné zkumavce ponechat 5 minut při pokojové teplotě, aby se zbývající etanol co nejvíce odstranil.
Návody k použití:
Návod k použití soupravy pro izolaci virové RNA
