FAQ je proKit pro izolaci zvířecí celkové RNA

Následující analýza problémů, se kterými se můžete setkatextrakce RNA zvířecí tkáně/buňky will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA není extrahována nebo jsou výtěžky RNA nízké

Účinnost obnovy často ovlivňuje celá řada faktorů, jako je: obsah RNA ve vzorku tkáně, způsob operace, eluční objem atd.

1. Za provozu byla provedena ledová lázeň nebo kryogenní (4 °C) centrifugace.

Doporučení: Pracujte při pokojové teplotě (15-25 °C) po celou dobu procesu, nevytvářejte ledovou lázeň a odstřeďujte při nízkých teplotách.

2. Nesprávné uchování vzorku nebo příliš dlouhá doba skladování vzorku.

Doporučení: Vzorky skladujte při -80 °C nebo zmrazte v tekutém dusíku a vyhněte se opakovanému použití zmrazování a rozmrazování;zkuste pro extrakci RNA použít čerstvou tkáň nebo kultivované buňky.

3. Nedostatečná lýza vzorku.

Doporučení: Při homogenizaci tkáně zajistěte, aby byla tkáň dostatečně homogenizována a aby byly tkáňové buňky dostatečně rozštěpeny, aby se vysvětlilo uvolňování RNA.

4. Eluent není přidán správně.

Doporučení: Potvrďte, že RNase-Free ddH₂O se přidává po kapkách do středu membrány čistící kolony.

5. Do pufru RL2 nebo pufru RW2 nebyl přidán správný objem absolutního ethanolu.

Doporučení: Postupujte podle pokynů, přidejte správný objem absolutního etanolu do pufru RL2 a pufru RW2 a před použitím soupravy dobře promíchejte.

6. Dávkování vzorku tkáně není vhodné.

Doporučení: Použijte 10-20 mg tkáně nebo (1-5) × 10⁶buněk na 500 μl pufru RL1, protože nadměrné používání tkáně může mít za následek sníženou extrakci RNA.

7. Nesprávný eluční objem nebo neúplná eluce.

Doporučení: Eluční objem purifikační kolony je 50-200 μl;pokud není eluční efekt uspokojivý, doporučuje se prodloužit dobu umístění při pokojové teplotě po přidání předehřátého ddH bez RNázy₂O, např. 5-10 min.

8. Čistící kolona obsahuje ethanolový zbytek po promytí pufrem RW2.

Doporučení: Pokud po promytí pufrem RW2 zůstanou zbytky ethanolu, centrifugujte prázdnou zkumavku po dobu 1 minuty, čas pro operaci centrifugace prázdné zkumavky lze prodloužit na 2 minuty nebo lze purifikační kolonu umístit na 5 minut při pokojové teplotě, aby se adekvátně odstranil zbytkový etanol.

Purifikovaná RNA je degradována

Kvalita purifikované RNA souvisí s faktory, jako je uchování vzorku, kontaminace RNázou a manipulace atd.

1. Vzorky tkání nejsou uchovávány včas.

Doporučení: Pokud vzorky tkáně nebo buňky nejsou použity včas po odběru, okamžitě je kryokonzervujte při -80 °C nebo tekutém dusíku.K extrakci RNA použijte, kdykoli je to možné, nově odebraný vzorek tkáně nebo buněk.

2. Opakované zmrazování a rozmrazování vzorků tkáně.

Doporučení: Při uchovávání vzorků tkáně je nejlepší je nařezat na malé kousky pro konzervaci a při použití jeden z kousků odstranit, aby se zabránilo opakovanému zmrazení a rozmrazení vzorku a degradaci RNA.

3. Během operace je zavedena RNáza nebo nenosí jednorázové rukavice, masky atd.

Doporučení: Experimenty s extrakcí RNA se nejlépe provádějí v oddělených místnostech pro manipulaci s RNA a před experimentem se stůl vyčistí.

Během experimentu používejte jednorázové rukavice a masky, abyste minimalizovali degradaci RNA způsobenou zavedením RNázy.

4. Reagencie jsou během použití kontaminovány RNázou.

Doporučení: Pro související experimenty vyměňte za novou sadu Animal Total RNA Isolation Kit.

5. Centrifugační zkumavky, špičky atd. používané při manipulaci s RNA jsou kontaminovány RNázou.

Doporučení: Ujistěte se, že centrifugační zkumavky, špičky, pipety atd. používané při extrakci RNA jsou bez RNázy.

Purifikovaná získaná RNA ovlivňuje následné experimenty

RNA purifikovaná na purifikační koloně, pokud jsou ionty solí, obsah proteinu příliš velký, ovlivní následný experiment, jako je: reverzní transkripce,Northern Blot et al.

1. Eluovaná RNA má zbytky solí.

Doporučení: Ujistěte se, že byl do pufru RW2 přidán správný objem ethanolu a proveďte 2 promytí kolony pro čištění při rychlosti odstředění uvedené pro provoz;pokud tam jsou nějaké zbytky iontů soli, ponechte purifikační kolonu pufru RW2 po dobu 5 minut při pokojové teplotě a proveďte centrifugaci, abyste maximalizovali odstranění kontaminace solí.

2. Ethanolový zbytek v eluované RNA.

Doporučení: Potvrďte, že po promytí pufrem RW2 proveďte centrifugaci prázdné zkumavky rychlostí centrifugace uvedenou pro provoz, zvyšte dobu centrifugace prázdné zkumavky na 2 minuty, pokud jsou v ní ještě zbytky ethanolu, nebo ji po centrifugaci prázdné zkumavky nechte 5 minut při pokojové teplotě, abyste maximalizovali odstranění zbytků ethanolu.

Izolace typů vzorků nukleových kyselin

Sady pro izolaci RNA společnosti Foregene mohou získat úplnou izolaci/extrakci RNA z následujících zdrojů vzorků: Živočišná tkáň, rostlina, buňky, viry, krev atd.

Jak uložím sadu

Skladování při pokojové teplotě po dobu 24 měsíců.