Protilátky, také nazývané imunoglobuliny (Ig), jsou glykoproteiny, které se specificky vážou na antigeny.
 
Konvenční protilátkový přípravek se vyrábí imunizací zvířat a odběrem antiséra.Antisérum proto obvykle obsahuje protilátky proti jiným nepříbuzným antigenům a dalším proteinovým složkám v séru.Obecné molekuly antigenu většinou obsahují více různých epitopů, takže konvenční protilátky jsou také směsí protilátek proti více různým epitopům.Dokonce i konvenční sérové ​​protilátky namířené proti stejnému epitopu jsou stále složeny z heterogenních protilátek produkovaných různými klony B buněk.Proto se konvenční sérové ​​protilátky také nazývají polyklonální protilátky nebo zkráceně polyklonální protilátky.
 
Monoklonální protilátka (monoklonální protilátka) je vysoce uniformní protilátka produkovaná jediným klonem B buňky a je zaměřena pouze proti specifickému epitopu.Obvykle se připravuje hybridomovou technologií – technologie hybridomových protilátek je založena na technologii buněčné fúze, která kombinuje B buňky se schopností vylučovat specifické protilátky a myelomové buňky s nekonečnou růstovou kapacitou do B-buněčných hybridomů.Tato hybridomová buňka má vlastnosti rodičovské buňky.Může se neomezeně a nesmrtelně množit in vitro jako myelomové buňky a může syntetizovat a vylučovat specifické protilátky, jako jsou lymfocyty sleziny.Prostřednictvím klonování lze získat monoklonální linii odvozenou z jedné hybridomové buňky, tj. hybridomovou buněčnou linii.Protilátky, které produkuje, jsou vysoce homogenní protilátky proti stejné antigenní determinantě, tj. monoklonální protilátky.
 
Protilátky existují jako jeden nebo více monomerů ve tvaru Y (tj. monoklonální protilátky nebo polyklonální protilátky).Každý monomer ve tvaru Y se skládá ze 4 polypeptidových řetězců, včetně dvou identických těžkých řetězců a dvou identických lehkých řetězců.Lehký řetězec a těžký řetězec jsou pojmenovány podle jejich molekulové hmotnosti.Vrcholem struktury ve tvaru Y je variabilní oblast, která je vazebným místem pro antigen.(Výňatek z konceptu Detai Bio-monoklonální protilátky)
 
Struktura protilátky
Těžký řetěz
Existuje pět typů savčích těžkých řetězců Ig, pojmenovaných řeckými písmeny α, δ, ε, γ a μ.Odpovídající protilátky se nazývají IgA, IgD, IgE, IgG a IgM.Různé těžké řetězce se liší velikostí a složením.α a γ obsahují přibližně 450 aminokyselin, zatímco μ a ε obsahují přibližně 550 aminokyselin.
Každý těžký řetězec má dvě oblasti: konstantní oblast a variabilní oblast.Všechny protilátky stejného typu mají stejnou konstantní oblast, ale mezi protilátkami různých typů jsou rozdíly.Konstantní oblasti těžkých řetězců y, a a 5 jsou složeny ze tří Ig domén v tandemu, s pantovou oblastí pro zvýšení její flexibility;konstantní oblasti těžkých řetězců μ a ε jsou složeny ze 4 Ig domén.Variabilní oblast těžkého řetězce protilátky produkované různými B buňkami je odlišná, ale variabilní oblast protilátky produkovaná stejnou B buňkou nebo buněčným klonem je stejná a variabilní oblast každého těžkého řetězce je dlouhá přibližně 110 aminokyselin., A tvoří jedinou Ig doménu.
 
Světelný řetěz
U savců existují pouze dva typy lehkých řetězců: typ lambda a typ kappa.Každý lehký řetězec má dvě spojené domény: konstantní oblast a variabilní oblast.Délka lehkého řetězce je asi 211~217 aminokyselin.Dva lehké řetězce obsažené v každé protilátce jsou vždy stejné.U savců má lehký řetězec v každé protilátce pouze jeden typ: kappa nebo lambda.U některých nižších obratlovců, jako jsou chrupavčité ryby (chrupavčité ryby) a kostnaté ryby, se také nacházejí jiné typy lehkých řetězců, jako je typ iota (iota).
 
Fab a Fc segmenty
Fc segment lze přímo kombinovat s enzymy nebo fluorescenčními barvivy pro značení protilátek.Je to část, kde se protilátka během procesu ELISA přinýtuje na destičku, a je to také část, kde je druhá protilátka rozpoznána a navázána při imunoprecipitaci, imunoblotu a imunohistochemii.Protilátky mohou být hydrolyzovány na dva F(ab) segmenty a jeden Fc segment proteolytickými enzymy, jako je papain, nebo mohou být rozbity z pantové oblasti pepsinem a hydrolyzovány na jeden F(ab)2 segment a jeden Fc segment.Fragmenty IgG protilátek jsou někdy velmi užitečné.Kvůli nedostatku Fc segmentu se F(ab) segment nebude vysrážet s antigenem, ani nebude zachycen imunitními buňkami ve studiích in vivo.Vzhledem k malým molekulárním fragmentům a nedostatku síťovací funkce (kvůli nedostatku Fc segmentu) se Fab segment obvykle používá pro radioaktivní značení ve funkčních studiích a Fc segment se používá hlavně jako blokující činidlo při histochemickém barvení.
 
Proměnné a konstantní oblasti
Variabilní oblast (V oblast) se nachází v 1/5 nebo 1/4 (obsahující přibližně 118 aminokyselinových zbytků) H řetězce blízko N-konce a 1/2 (obsahující přibližně 108-111 aminokyselinových zbytků) v blízkosti N-konce L řetězce.Každá V oblast má peptidový kruh tvořený vnitrořetězcovými disulfidovými vazbami a každý peptidový kruh obsahuje přibližně 67 až 75 aminokyselinových zbytků.Složení a uspořádání aminokyselin ve V oblasti určuje vazebnou specificitu protilátky pro antigen.Díky neustále se měnícím typům a sekvenci aminokyselin ve V oblasti může být vytvořeno mnoho druhů protilátek s různými vazebnými antigenovými specificitami.V oblasti L řetězce a H řetězce se nazývají VL a VH, v daném pořadí.Ve VL a VH má složení aminokyselin a sekvence některých lokálních oblastí vyšší stupeň variace.Tyto oblasti se nazývají hypervariabilní oblasti (HVR).Aminokyselinové složení a uspořádání ne-HVR částí ve V oblasti jsou relativně konzervativní, což se nazývá rámcová oblast.Ve VL jsou tři hypervariabilní oblasti, obvykle umístěné na aminokyselinových zbytcích 24 až 34 a 89 až 97, v daném pořadí.Tři HVR VL a VH se nazývají HVR1, HVR2 a HVR3.Výzkum a analýza rentgenové krystalové difrakce prokázala, že hypervariabilní oblast je skutečně místem, kde se protilátkový antigen váže, proto se nazývá oblast určující komplementaritu (CDR).HVR1, HVR2 a HVR3 z VL a VH mohou být nazývány CDR1, CDR2 a CDR3, v daném pořadí.Obecně má CDR3 vyšší stupeň hypervariability.Hypervariabilní oblast je také hlavním místem, kde existují idiotypické determinanty molekul Ig.Ve většině případů hraje H řetězec důležitější roli ve vazbě na antigen.
konstantní oblast (oblast C)se nachází ve 3/4 nebo 4/5 (přibližně od aminokyseliny 119 k C konci) H řetězce blízko C konce a 1/2 (obsahuje asi 105 aminokyselinových zbytků) blízko C konce L řetězce.Každá funkční oblast H řetězce obsahuje asi 110 aminokyselinových zbytků a obsahuje peptidový kruh složený z 50-60 aminokyselinových zbytků spojených disulfidovými vazbami.Aminokyselinové složení a uspořádání této oblasti jsou relativně konstantní ve stejném řetězci izotypu L živočišného Ig a ve stejném řetězci typu H.Totéž, může se pouze specificky vázat na odpovídající antigen, ale struktura jeho C oblasti je stejná, to znamená, že má stejnou antigenicitu.Koňská anti-lidská IgG sekundární protilátka (nebo anti-protilátka) může být kombinována se dvěma A kombinace protilátek (IgG) proti různým exotoxinům.To je důležitý základ pro přípravu sekundárních protilátek a aplikaci fluoresceinu, izotopů, enzymů a dalších značených protilátek.
 
 
Související produkty:
Kit Cell Direct RT-qPCR