Tipy pro zlepšení obnovy lepidla

1. Zvyšte zatížení vzorku během elektroforézy.

2. Použijte čerstvě připravený elektroforetický pufr.

3. Při řezání lepidla se snažte řezat pouze lepidlo pomocí proužků, abyste snížili objem řezání lepidla: nepotřebujte lepidlo s několika účelovými úlomky, jinak to ovlivní rychlost zotavení.

4. Po roztavení dvou nebo více kusů lepidla použijte tubu bez ohledu na to, jak velký je objem, a přeneste ji do stejného sloupce.

5. Roztoku přidaného do solu může být o něco více, což více napomáhá navázání DNA na membránu, ale obecně nepřesahuje 750 ul.

6. Klíčem k regeneraci gelu je navázání DNA na kolonu prostřednictvím koncentrace soli, kyselosti (náboje) a hydrofobnosti roztoku v koloně.Pokud je tedy pH elektroforetického pufru příliš vysoké, lze do solu přidat 10 ul (pH 5,0, 3 mol/l NaAC);za účelem lepšího zachycení molekul DNA na membráně lze do kapaliny po rozpuštění lepidla přidat 30% isopropanol, který se zahřeje.

7. Před přidáním eluentu nechte kolonu několik minut (asi 10 minut) při pokojové teplotě, aby se ethanol zcela odpařil.

8. Nakonec přidejte méně eluentu, abyste minimalizovali regenerační objem.Obecně se k eluci používá 30-50 μl eluentu (ne příliš málo, jinak nebude schopen smáčet membránu, což není vhodné k eluci);eluční kapky jsou ve středu membrány, aby plně eluovaly DNA navázanou na membránu.

9. Po přidání eluentu lze eluovat ve vodní lázni o teplotě 55 stupňů po dobu 5 minut nebo umístit do vodní lázně o teplotě 50 stupňů na více než 10 minut, nebo uzavřít parafilmem při teplotě 4 stupňů přes noc a poté odstředit pro zotavení druhý den, efekt je dobrý.

10.Odstředěný eluát přidejte zpět do adsorpční kolony a znovu odstřeďte.

Podrobné metody a postupy pro získání produktu PCR

1. Obyčejná recyklace pryže

Pokud chcete lepidlo obnovit, je nejlepší použít sadu, která je pohodlná a má o něco vyšší rychlost zotavení.Pokud to opravdu potřebujete obnovit ručně, můžete přidat 3násobek objemu TE po odříznutí lepidla.Po roztavení ve vodní lázni se fenol, fenol/chloroform čistě extrahuje a vysráží se ethanol.A je to.

2. Získání DNA z gelů s nízkou teplotou tání

Purifikace fragmentů DNA Přidejte TE (10 mmol/l Tris-HCl pH 8,0, 0,1 mmol/l EDTA) rovnající se objemu gelu a vložte do vodní lázně o teplotě 65 °C na 5 minut, aby se gel zcela rozpustil.

Poté, co byla přivedena na teplotu místnosti, bylo přidáno stejné množství fenolu (nasyceného TE, TE byl uzavřen v horní vrstvě a spodní vrstva fenolu byla odstraněna) a směs byla jemně promíchána (není nutné míchání) a odstřeďována při 12 000 otáčkách za minutu po dobu 3 minut.Opakujte 1-2x.

Odeberte supernatant, přidejte 0,1 objemu 3 mol/l octanu sodného (pH 5,2) a 2,5násobný objem absolutního ethanolu, aby se provedlo srážení ethanolem.Purifikovanou DNA rozpusťte ve vhodném množství TE, změřte obsah a připravte k použití (lze použít pro analýzu struktury cílového genu, přípravu sondy atd.).

3. PCR izolace s dobrou amplifikační specificitou

Pokud je specifičnost PCR amplifikace dobrá, jde pouze o jednoduchou purifikaci a izolaci PCR produktu.K produktu PCR můžete přidat 50 ug/ml proteinázy K, 37 stupňů po dobu 1 hodiny, extrahovat jednou fenolem/chloroformem, jednou extrahovat chloroformem a přidat 0,1 objemu supernatantu.Octan sodný byl získán vysrážením 2,5 objemy absolutního ethanolu.

Související produkty:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/