Laboratorní testování začíná odběrem vzorků a odběr vzorků je nejjednodušší přehlédnout.Nejdůležitější pro odběr vzorků je vybrat správný typ vzorku, použít vhodné nástroje pro odběr vzorků a provést přiměřenou přepravu a zpracování.

I. Typ vzorku

Běžné typy vzorků jsou následující:

Metoda odběru vzorků může odkazovat na technické specifikace pro environmentální monitorování nového koronaviru na zemědělském obchodním (bazarovém) trhu“:

1. Výtěry z výtěrů z krku, rukou, oděvů a dalších předmětů praktikujících: je nutné použít roztok pro konzervaci viru ve zkumavce pro odběr viru a plně infiltrovat odběrové vatové tampony.Povrch země) se opakovaně aplikuje a oplachuje více než 3krát.Zároveň je nutné provést vícebodové distribuované vzorkování na povrchu vzorkovaného objektu.

2. Vzorky tamponů z povrchu potravin: Vzorky potravin nelze odebírat přímo.Potraviny, které mají být odebrány, by měly být před odběrem vzorků tamponů pečlivě odděleny a uloženy v čistém sáčku na odběr vzorků.Po úplném namočení vzorkovacího vatového tamponu je nutné použít roztok pro konzervaci viru ve zkumavce pro odběr viru k opakovanému potření a opláchnutí povrchu odebraného vzorku potraviny více než 3krát.Zároveň je nutné provést vícebodové distribuované vzorkování na povrchu vzorku.

3. Vzorky odpadních vod: Podle distribuce kanalizačního systému na trhu vyberte 2-3 místa odběru odpadních vod se zaměřením na sběr vnitřního potrubí, po směru toku vody nebo napojení na obecní potrubní síť.Chcete-li odebrat vzorek tampónu, ponořte jej do odpadní vody pomocí vzorkovacího vatového tamponu, aby adsorboval odpadní vodu, a propláchněte jej ve vzorkovací zkumavce více než 3krát.Pro odběr vzorků odpadních vod použijte polyetylenové plastové lahve k odběru 30-500 ml vzorků odpadní vody;pro sběr odpadních vod o objemu větším než 500 ml lze použít polyetylenové plastové kbelíky nebo speciální zařízení na obohacování vzorků vody na místě.Zároveň je nutné provést vícebodové distribuované vzorkování pro místo odběru odpadních vod.

4. Vzorky zvířat: U živých zvířat lze odběrové výtěry použít k odběru výtěrů z povrchu těla, orofaryngeálních výtěrů a análních výtěrů a také lze odebrat vzorky exkrementů nebo sekretu a zaznamenat je na záznamový list.U vzorků zvířat, které byly staženy z kůže atd., použijte vatové tampony k odběru vzorků výtěru z povrchu těla a tělní dutiny.Je nutné použít roztok na uchování viru ve zkumavce pro odběr viru, aby plně infiltroval vzorkovací vatový tampon, a poté opakovat aplikaci povrchu odebraného vzorku potraviny.Shabu více než 3krát.Zároveň je nutné provést vícebodové distribuované vzorkování na povrchu vzorku.

5. Ostatní zařízení: kontejnery pro přepravu a chov zvířat, jako jsou klece nebo akvária.Nejprve pozorujte nebo pochopte konkrétní typy zvířat skladovaných a chovaných v nádobě a odebírejte vzorky výtěrů na vnitřní stěnu nádoby nebo tekuté vzorky obsahu.

6. Odebírejte vzorky aerosolu v oblastech, kde se shromažďují lidé, špatně větraných místních obchodních prostorech, kancelářích a odpočívárnách.

II. Vzorkovací nástroje
1. Zkumavka pro odběr krve
Pokud potřebujete provést testování nukleových kyselin a antikoagulační vzorky později, doporučuje se k odběru krve použít vakuovou krevní cévu obsahující antikoagulant EDTA;pro vzorky séra se doporučuje použít vakuovou krevní cévu bez antikoagulantu.

2. Odběrový tampon

Doporučuje se používat polypropylenové tampony místo tamponů z alginátu vápenatého nebo tamponů s dřevěnými tyčemi, protože mohou obsahovat látky, které inaktivují některé viry a inhibují testování PCR.Tampóny s bavlněnými hlavičkami nelze použít, protože bavlněná vlákna mají silnou adsorpci bílkovin a nelze je snadno eluovat do následného konzervačního roztoku.

V „Technických specifikacích pro smíšený odběr a detekci nových nukleových kyselin koronaviru 10 v 1“ je jasně stanoveno, že „vzorkový tampon by měl být vyroben z polyesteru, nylonu a dalších materiálů bez bavlny a bez alginátu vápníku a rukojeť by měla být vyrobena z nedřevěného materiálu.Bod zlomu je asi 3 cm od horní části tamponové hlavy, kterou lze snadno zlomit.

CDC ve Spojených státech také uvedlo: „Používejte pouze tampony ze syntetických vláken s plastovými nebo drátěnými násadami.Nepoužívejte tampony z alginátu vápenatého nebo tampony s dřevěnými násadami,protože mohou obsahovat látky, které inaktivují některé viry a inhibují testování PCR.

V současné době je široce používán jednorázový sterilní nylonový vločkovací tampon kombinovaný s plastovou tyčinkou.Vločkovací tampon má lepší absorpci vody a rychlost uvolňování.Podle různých míst odběru má tamponová hlavice také různé velikosti a vlákna.Tloušťka.“

3. Vzorek řešení pro uchování při přepravě

Konzervační roztok pro inaktivaci viru: vhodné množství koncentrace guanidinové soli a různé složky pro lýzu viru mohou přímo lyžovat virus, aby se uvolnila nukleová kyselina, inaktivovala RNáza a DNáza a zajistila se integrita nukleové kyseliny, kterou lze použít pro následnou detekci qPCR.Nelze jej použít pro kultivaci a izolaci virů.

Roztok pro transport a konzervaci viru: obsahuje soli, aminokyseliny, vitamíny, glukózu a bílkoviny potřebné pro přežití viru, které mohou zachovat aktivitu viru.Může být použit pro extrakci nukleové kyseliny a detekci viru v budoucnu a může být také použit pro kultivaci a separaci viru.

4. Zkumavka na uchování vzorku a sáček na vzorky

Zkumavka pro uložení vzorku by měla být sterilní plastová zkumavka se šroubovacím uzávěrem, která neadsorbuje nukleovou kyselinu.Každá zkumavka se vzorkem by měla být zakryta sáčkem na vzorky, aby se zabránilo úniku a kontaminaci vzorku.

III.Rušivé látky ve vzorku

Rušivé látky v PCR experimentech

1. endogenní interference

Látky přítomné ve vzorku těla mohou rušit detekci jiných látek.

Krev:hem (>1 mg/ml), hemin (>0,1 ng/μl), triglyceridy, IgG atd.;

Moč:močovina (20 mM);

Stolice:rostlinné polysacharidy, cholát;

Tkáň:proteáza, kolagen;

Mléko: proteáza, vápenatý iont;

Drogy: antibiotika, antivirotika, hormony atd.

jiný.

2. exogenní interference

Pochází z látek, které mohou interferovat s detekcí jiných látek in vitro.Aditiva a látky vzorků, se kterými je možné se během odběru a zpracování vzorku dostat:

Testovací zásoby: sérový separační gel, nádoba na odběr vzorků a pryžová zátka, katetr, tekutina na proplachování katetru, pudr na rukavice atd.

Antikoagulant: heparin (>0,1 U/ml), EDTA (>0,5 mM), atd.;

Organická rozpouštědla: isopropanol (>0,1 IU/ml), betain, dimethylsulfoxid, formamid, glycerin, PEG, atd.;

Dezinfekční prostředky: alkoholy (ethanol>1%), aldehydy, fenoly (fenol>0,2%), peroxidy, silné kyseliny (HCL), silné zásady (NaOH) atd.;

Čisticí prostředek:SDS (>0,005 %);

Půda: Humus

Barvivo: Indigo

jiný.

Za skutečných venkovních podmínek odběru vzorků, jako je odběr vzorků z prostředí, mohou vzorky obsahovat různé interferující látky a složení interferujících látek v každé lokalitě je jiné, což vyžaduje, aby byly experimenty s rušením PCR prováděny podle místních podmínek.

IV.Vzorové podmínky skladování a přepravy

Čerstvě odebrané klinické vzorky by měly být odeslány do laboratoře do 2 až 4 hodin po odběru při teplotě 2 °C až 8 °C.Skladujte při 4 °C do 24 hodin.Vzorky použité pro izolaci viru a detekci nukleových kyselin by měly být testovány co nejdříve.Vzorky, které lze testovat do 24 hodin, lze skladovat při 4 °C;Vzorky, které nelze detekovat do 24 hodin, by měly být uchovávány při teplotě -70 °C nebo nižší (pokud tomu tak není – Uchovávejte při teplotě 70 °C v chladničce při teplotě -20 °C).

Souhrn:Pro následné testování je nezbytný standardizovaný odběr, přeprava a skladování vzorků.Falešná negativita mnoha laboratorních testů je způsobena nesprávným odběrem, přepravou a skladováním vzorků, které vedou k degradaci virové nukleové kyseliny.Mnoho laboratoří však stále ignoruje důležitost odběru vzorků.Doufám, že tento článek může probudit pozornost každého k odběru vzorků a učinit více vědecký a rozumný odběr vzorků!

Podobný produkt:

Variantní souprava pro detekci nukleových kyselin SARS-CoV-2 (I) (metoda fluorescenční sondy Multiplex PCR) – pro detekci mutantů z Brazílie, Jižní Afriky a Spojeného království