Kolik toho víš

O Nextrakce kyseliny ukleové

Začátek a konec purifikované nukleové kyseliny

Všechno je na začátku těžké, nejvíc je vyčištěná nukleová kyselina

Zahájení molekulárních experimentů pro následné experimenty

Úspěch nebo neúspěch má zásadní vliv.

Stopový/ultrastopový UV spektrofotometr je upřednostňován mnoha vědeckými výzkumníky, protože dokáže jednoduše, rychle a ekonomicky detekovat koncentraci nukleových kyselin a zbytky proteinů a solí.

Jak všichni víme, A260 znamená hodnotu OD absorbance nukleové kyseliny, A280 znamená hodnotu absorbance OD koncentrace proteinu, A230 znamená hodnotu absorbance OD koncentrace iontů soli, takže A260 dokáže převést koncentraci nukleové kyseliny, A260/280 znamená zbytek proteinu, A260/230 znamená zbytek iontů soli, ale je to jen velké množství výsledků měření, které objevili výzkumnícikonvenčnívěřit, že to může vysvětlit čistotu DNA a RNAdo určité míry.Není to jediný standard pro identifikaci výtěžku a čistoty nukleové kyseliny, používá se pouze jako referenční a není to „zlatý standard“.

Příručka Thermo Fisher ND-2000 zdůrazňuje spolehlivost výsledků testu

Důvodem je, že výsledky získané použitím mikro/ultramikro UV spektrofotometru odrážejí výtěžek a čistotu nukleové kyseliny pouze ze strany a existuje mnoho ovlivňujících faktorů (optická dráha, objem vzorku, koncentrace vzorku, hodnota pH, další ionty ovlivňující měření absorbance atd.), naměřená hodnota OD nemusí být nutně přesná.Současně, kvůli nedostatku specifičnosti materiálu pro stanovení hodnoty absorbance, jednořetězcová DNA, dvouřetězcová DNA, RNA, dNTP a některé proteiny mají absorpční píky při vlnové délce 260 nm a koncentrace určená samotným A260 nemusí být nutně skutečnou DNA nebo RNA.Koncentraci a její integritu a degradaci nelze posuzovat.

Jak tedy posoudit kvalitu naší purifikované nukleové kyseliny?Kromě použití mikro/ultramikro UV spektrofotometru pro detekci jsou také vyžadovány metody, jako je elektroforéza na agarózovém gelu, aby se vizuálně zobrazila čistota a integrita nukleové kyseliny a aby se do určité míry indikovala koncentrace.Tímto způsobem je výtěžek a čistota nukleové kyseliny získaná z výsledků detekce různých metod věrohodná.

Experimentální srovnání grafů

Genomová DNA buněk H1299 byla extrahována pomocí souprav společnosti A pro extrakci DNA a byla pozorována významná kontaminace nečistotami, což vedlo k vysokým hodnotám OD

(hodnota měření OD a odpovídající elektroferogram)

Hodnotící index

Existuje „zlatý standard“ pro testování výtěžku a kvality nukleových kyselin?

Pokud víme, žádná jednoduchá, rychlá a levná metoda neexistuje.Ať už se jedná o spektrofotometr, gelovou elektroforézu nebo hmotnostní spektrometrii, všechny odrážejí koncentraci a čistotu nukleové kyseliny v roztoku z různých hledisek a je třeba je posuzovat vzájemným odkazem.

Nejlepší index hodnocení je vždynavazující experimentální aplikace.Neovlivňuje účinnost reverzní transkripce a PCR amplifikace.Získání spolehlivých amplifikačních produktů a hodnot Ct a získání kompletní sekvence sekvenováním je úspěšnou extrakcí nukleové kyseliny.

Abychom to shrnuli, pohled teorie pouze poměrů by měl být zpochybněn pohledem na „použití dobrých následných experimentálních výsledků jako dobrých extrakčních parametrů“!

Doporučené sady pro extrakci DNA RNA Foregene pro dosažení vysoké čistoty DNA/RNA:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/