Následující analýza možných problémů vBuccaltampon/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Čistící kolona je ucpaná

V této soupravě je při operaci extrakce genomové DNA purifikační kolona přímo adsorbována na směs enzymatické lýzy vzorku bez kroku centrifugace a purifikační kolona může být zablokována v důsledku neúplné enzymizace a vysoké viskozity vzorku.

Možné příčiny jsou následující:

1. Neúplné enzymatické štěpení vzorků tkáně.

Doporučení: Dobu zpracování vzorku Foregene Protease lze vhodně prodloužit nebo lze supernatant odebrat po centrifugaci při 12 000 ot./min (~13 400× g) po dobu 5 minut.

2. Nadměrné používání vzorků tkání nebo velkých tkání.

Doporučení: Nejlepší je nepřekročit 1Buccal tampon ve vzorku;pokud je vzorek příliš velký, zvyšte odpovídajícím způsobem dávku pufru ST1, foregenové proteázy, pufru ST2.

3. Viskozita vzorku je příliš vysoká.

Doporučení: Vzorky lze před extrakcí genomové DNA vhodně naředit 10 mM Tris-HCl.

4. Fragmenty krevní karty byly odsáty.

Doporučení: Doba přechodné centrifugace v kroku 6 extrakce genomu krevní skvrny (FTA Card) může být vhodně prodloužena.

Nízký výtěžek nebo žádná DNA

Často existuje řada faktorů, které ovlivňují výtěžek genomové DNA, včetně původu vzorku, podmínek uchovávání vzorku, přípravy vzorku, manipulace atd.

Během extrakce nelze získat genomovou DNA

Možné příčiny jsou následující:

1. Nesprávné uchování vzorků nebo příliš dlouhé skladování vede k degradaci genomové DNA.

Doporučení: Výtěry z úst by měly být pokud možno čerstvě odebrány a není vhodné používat konzervované výtěry pro operace extrakce genomové DNA;vzorky krevních skvrn by měly zajistit, že kvalita je kvalifikovaná a doba skladování by neměla být příliš dlouhá.

2. Příliš malé využití tkáně nemusí mít za následek žádnou extrakci odpovídající genomové DNA.

Doporučení: Postupujte podlebuccal otřete pokyny k odběru vzorků v návodu k obsluze a otřete je tolikrát, kolikrát je to možné, aby bylo možné k ústnímu tamponu připojit dostatek buněk pro extrakci genomové DNA;pro extrakci vzorku krevních skvrn může být plocha řezání krevních skvrn vhodně zvětšena.

3. Foregenová proteáza je nesprávně konzervována, což má za následek snížení její aktivity nebo inaktivaci.

Doporučení: Potvrďte podmínky skladováníForegene Protease nebo ji nahraďte novou Foregene Protease pro enzymatickou reakci.

4. Nesprávná konzervace soupravy nebo doba skladování je příliš dlouhá, což má za následek selhání některých součástí soupravy.

Doporučení: Kupte si novýBuccal výtěr DNAizolace souprava pro související postupy.

5. Buffer WB nepřidává absolutní etanol.

Doporučení: Ujistěte se, že pufr WB přidává správný objem absolutního etanolu.

6. Eluent není správně přidán do silikonového filmu.

Doporučení: Přidejte 65°Cpředehřátý eluent klesne doprostřed silikonové membrány a nechá se 5 minut při pokojové teplotě, aby se zvýšila účinnost eluce.

Low-yield genomové DNA izolovaný

Možné příčiny jsou následující:

1. Nesprávné uchování vzorků nebo příliš dlouhé skladování vede k degradaci genomové DNA.

Doporučení: Orální výtěry se přednostně odebírají čerstvě a konzervované výtěry by se neměly používat pro extrakci genomové DNA.

2. Pokud je množství vzorku tkáně příliš malé, obsah extrahované genomové DNA bude nižší.

Doporučení: Postupujte podle pokynů k odběru vzorků ústního výtěru v provozní příručce a otřete je tolikrát, kolikrát je to možné, aby bylo možné k ústnímu výtěru připojit dostatek buněk pro extrakci genomové DNA.

3. Foregenová proteáza je nesprávně konzervována, což má za následek snížení její aktivity nebo inaktivaci.

Doporučení: Potvrďte podmínky skladováníthe Foregenovou proteázu nebo ji vyměňte za novou Foregene Protease pro enzymatickou reakci.

4. Problémy s eluenty.

Doporučení: Pro eluci použijte pufr EB;pokud používáte ddH₂O nebo jiných eluentech, potvrďte, že pH eluátu je mezi 7,0-8,5.

5. Eluát není správně přidáván po kapkách.

Doporučení: Přidejte kapky eluentu doprostřed silikonové membrány a nechte 5 minut při pokojové teplotě pro zvýšení účinnosti eluce.

6. Eluční kapalina se hromadí příliš málo.

Doporučení: Použijte eluent pro eluci genomové DNA alespoň tak, jak je požadováno v pokynechNeméně než 15μl.

Lach čistota of genomové DNAizolovaný

Nízká čistota genomové DNA může vést k selhání nebo neuspokojivým výsledkům následných experimentů, jako jsou: enzymy nelze rozříznout, PCR nemůže získat požadovaný genový fragment atd.

Možné příčiny jsou následující:

1. Heteroproteinové znečištění, znečištění RNA.

Analýza: Purifikační kolona nebyla promyta pomocí pufru PW;promývací purifikační kolona Buffer PW nebyla promyta správnou rychlostí odstředění.

Doporučení: Před přidáním ethanolu se ujistěte, že v supernatantu není žádná sraženina;ujistěte se, že čistící kolonu promyjete podle návodu a tento krok nelze vynechat.

2. Znečištění ionty nečistot.

Analýza: Promývací purifikační kolona pufru WB byla vynechána nebo promyta pouze jednou, což vedlo ke zbytkové iontové kontaminaci.

Doporučení: Buffer WB promyjte 2x podle pokynů, abyste co nejvíce odstranili zbytkové ionty.

3. Kontaminace RNA enzymem.

Analýza: Cizí RNázy byly přidány do pufru;Operace promývání pufrem PW byla nesprávná, což vedlo ke zbytkům RNázy, ovlivňujícím následné experimentální operace RNA, jako je in vitro transkripce.

Doporučení: Nukleová kyselina řady Foregeneisolakity mohou odstranit RNA bez dalšího přidání RNázy,tím pádem bukální výtěr/FTA karta DNA Isolation Kitpotřebn't přidat RNázu;určitě dodržujte pokyny pro promývací purifikační kolonu Buffer PW a tento krok nelze vynechat.

4. Ethanolový zbytek.

Analýza: Buffer WB neprovedl centrifugaci prázdné zkumavky po promytí purifikační kolony.

Doporučení: Proveďte správnou operaci centrifugace prázdné zkumavky podle pokynů.

5. Jiné znečištění nečistotami.

Analýza: Uložené vzorky nebo speciální vzorky nejsou předem upraveny.

Doporučení: Důkladně předem ošetřete vzorek podle návodu.