Souprava pro izolaci virové DNA&RNA Soupravy pro přípravu purifikace virové DNA a RNA
Specifikace
50 přípravků, 200 přípravků
Izolační extrakční souprava pro purifikaci nukleové kyseliny virové RNA využívá rotační kolonu a formuli vyvinutou společností Foregene, která dokáže účinně extrahovat vysoce čistou a vysoce kvalitní virovou RNA ze vzorků, jako je plazma, sérum, bezbuněčná tělesná tekutina a supernatant buněčné kultury.Kit specificky přidává lineární akrylamid, který dokáže snadno zachytit malá množství RNA ze vzorků.RNA-Only Column může účinně vázat RNA.Souprava dokáže zpracovat velké množství vzorků současně.
Celá souprava neobsahuje RNázu, takže purifikovaná RNA nebude degradována.Pufry viRW1 a viRW2 mohou zajistit, že získaná virová nukleová kyselina je bez proteinu, nukleázy nebo jiných nečistot, což lze přímo použít pro následné experimenty molekulární biologie.
Součásti stavebnice
Lineární akrylamid |
Vyrovnávací paměť DRL |
Buffer RW1, Buffer RW2 |
ddH bez RNázy2O |
Sloupec DNA/RNA |
Instrukce |
Vlastnosti a výhody
■ Provoz při pokojové teplotě (15-25℃) během celého procesu, bez ledové lázně a nízkoteplotního odstřeďování.
■ Kompletní sada bez RNázy, není třeba se obávat degradace RNA.
■ Vysoký výtěžek nukleových kyselin: Sloupec pouze pro DNA/RNA a jedinečný vzorec může účinně čistit DNA a RNA.
■ Velká kapacita zpracování vzorků: pokaždé lze zpracovat až 200 μl vzorků.
■ Vysoká rychlost: snadné ovládání a dokončení do 20 minut.
■ Bezpečnost: nevyžaduje se žádné organické činidlo.
■ Vysoká kvalita: Purifikované fragmenty RNA mají vysokou čistotu, neobsahují protein a jiné nečistoty a mohou splňovat různé následné experimentální aplikace.
Aplikace sady
Je vhodný pro extrakci a purifikaci virové nukleové kyseliny ve vzorcích, jako je plazma, sérum, bezbuněčná tělesná tekutina a supernatant buněčné kultury.
Pracovní postup
Diagram
Skladování a trvanlivost
■ Tato sada může být skladována po dobu 24 měsíců v suchu při pokojové teplotě (15-25℃);pokud je třeba skladovat delší dobu, lze jej skladovat při teplotě 2–8 °C.
■ Lineární roztok akrylamidu lze skladovat při pokojové teplotě po dobu 7 dnů;po obdržení soupravy ji prosím vyjměte a uložte při teplotě -20°C.
■ Po přidání lineárního akrylamidu do pufru DRL jej lze skladovat při teplotě 2–8 °C po dobu až 48 hodin.Použijte prosím hotové řešení.
Průvodce analýzou problémů
Následuje analýza problémů, se kterými se můžete setkat při extrakci virové DNA/RNA, a doufat, že vám to pomůže při vašich experimentech.Kromě toho pro jiné experimentální nebo technické problémy, než jsou provozní pokyny a analýza problémů, máme vyhrazenou technickou podporu, která vám pomůže.Pokud máte nějaké potřeby, kontaktujte nás: 028-83360257 nebo e-mail:
Tech@foregene.com.
Žádná extrakce nukleové kyseliny nebo nízký výtěžek nukleové kyseliny
Obvykle existuje mnoho faktorů, které ovlivňují účinnost regenerace, jako je: obsah nukleové kyseliny ve vzorku, operační metoda, eluční objem atd.
Analýza běžných příčin:
1. Během procedury byla provedena ledová lázeň nebo nízkoteplotní (4 °C) centrifugace.
Doporučení: Pracujte při pokojové teplotě (15-25°C) během celého procesu, nepoužívejte ledovou lázeň a nízkoteplotní centrifugaci.
2. Vzorek byl skladován nesprávně nebo byl skladován příliš dlouho.
Doporučení: Vzorky skladujte při -80°C a vyhněte se opakovanému zmrazování a rozmrazování;zkuste použít čerstvě odebrané vzorky pro extrakci nukleové kyseliny.
3. Nedostatečná lýza vzorku.
Doporučení: Ujistěte se, že vzorek a pracovní roztok pro lýzu jsou důkladně promíchány a inkubovány při pokojové teplotě (15-25°C) po dobu 10 minut.
4. Nesprávné přidání eluentu.
Doporučení: Ujistěte se, že ddH2O bez RNázy je přidána po kapkách do středu membrány čistící kolony a nekápněte ji na prstenec čistící kolony.
5. Do pufru RW2 nebyl přidán správný objem absolutního ethanolu.
Doporučení: Postupujte podle pokynů, přidejte správný objem absolutního etanolu do pufru RW2 a před použitím soupravy dobře promíchejte.
6. Nevhodný objem vzorku.
Návrh: 200 µl vzorku se zpracuje na každých 500 µl pufru DRL.Nadměrné zpracování vzorku povede k nižšímu výtěžku extrakce nukleové kyseliny.
7. Nevhodný eluční objem nebo neúplná eluce.
Doporučení: Objem eluentu čistící kolony je 30-50μl;pokud není eluční efekt uspokojivý, doporučuje se prodloužit dobu při pokojové teplotě po přidání předehřáté ddH2O bez RNázy, např. 5-10 min.
8. Ethanol zůstává na koloně po promytí pufrem RW2.
Návrh: Pokud po centrifugaci s pufrem RW2 po dobu 2 minut zůstane ethanol, lze kolonu po centrifugaci umístit na 5 minut při pokojové teplotě, aby se zcela odstranil zbytkový etanol.
Purifikovaná nukleová kyselina je degradována
Kvalita purifikované nukleové kyseliny souvisí s konzervací vzorku, kontaminací RNázou, provozem a dalšími faktory.Analýza běžných příčin:
1. Odebrané vzorky nebyly včas uloženy.
Doporučení: Pokud vzorek po odběru nepoužijete včas, ihned jej uložte při -80°C při nízké teplotě.Pro extrakci RNA zkuste použít čerstvě odebrané vzorky.
2. Odeberte vzorky a opakovaně je zmrazujte a rozmrazujte.
Doporučení: Během odběru a skladování vzorků se vyvarujte zmrazování a rozmrazování (ne více než jednou), jinak se sníží výtěžek nukleové kyseliny.
3. Na operačním sále je zavedena RNáza nebo se nenosí jednorázové rukavice, masky apod.
Doporučení: Experimenty s extrakcí RNA se nejlépe provádějí v samostatné operační místnosti RNA a laboratorní stůl by měl být před experimentem vyčištěn.
Během experimentu používejte jednorázové rukavice a masky, abyste se v největší míře vyhnuli degradaci RNA způsobené zavedením RNázy.
4. Činidlo bylo během použití kontaminováno RNázou.
Doporučení: Pro související experimenty nahraďte novou soupravou pro izolaci virové DNA/RNA.
5. Centrifugační zkumavky a špičky pipet používané pro manipulaci s RNA jsou kontaminovány RNázou.
Doporučení: Ujistěte se, že centrifugační zkumavky, špičky pipet, pipety atd. používané pro extrakci RNA jsou bez RNázy.
Purifikovaná nukleová kyselina ovlivňuje následné experimenty
DNA a RNA purifikované purifikační kolonou, pokud je obsah iontů soli a proteinů příliš vysoký, ovlivní to následné experimenty, jako je: PCR amplifikace, reverzní transkripce atd.
1. Eluovaná DNA a RNA mají zbytkové ionty solí.
Doporučení: Ujistěte se, že je do pufru RW2 přidán správný objem absolutního etanolu, a promyjte purifikační kolonu dvakrát při rychlosti odstřeďování specifikované v návodu k obsluze;Proveďte centrifugaci, abyste minimalizovali kontaminaci solí ionty.
2. Eluovaná DNA a RNA mají ethanolové zbytky.
Doporučení: Po potvrzení promytí pufrem RW2 proveďte centrifugaci prázdné zkumavky při rychlosti centrifugace v návodu k obsluze;pokud jsou stále zbytky etanolu, můžete prázdnou zkumavku odstředit a poté ji umístit na 5 minut při pokojové teplotě, aby se zbytky etanolu co nejvíce odstranily.
Návody k použití:
Návod k použití sady pro izolaci virové DNA&RNA