Sada pro izolaci rostlinné DNA Protokol pro soupravy pro čištění genomové DNA pro rostliny
Specifikace
50 příprav, 100 příprav, 250 příprav
Tato souprava využívá kolonu obsahující pouze DNA, která dokáže specificky vázat DNA, Foregene proteázu a unikátní pufrovací systém, který výrazně zjednodušuje čištění rostlinné genomové DNA.Vysoce kvalitní genomickou DNA lze získat do 30 minut, což zabraňuje degradaci genomové DNA.
Silikagelová membrána obsahující pouze DNA použitá v koloně je jedinečným novým materiálem Foregene, který se dokáže účinně a specificky vázat na DNA a maximalizovat odstranění RNA, proteinů nečistot, iontů, polysacharidů, polyfenolů a dalších organických sloučenin.
Komponenty produktu
| Buffer PL1, Buffer PL2 |
| Buffer PW, Buffer WB, Buffer EB |
| Foregenová proteáza |
| Sloupec pouze pro DNA |
| Instrukce |
Vlastnosti a výhody
■ Žádná kontaminace RNázou: Sloupec pouze pro DNA, který je součástí sady, umožňuje během experimentu odstranit RNA z genomové DNA bez další RNázy, čímž se zabrání kontaminaci laboratoře exogenní RNázou.
■ Vysoká rychlost: Foregene Protease má vyšší aktivitu než podobné proteázy a rychleji tráví vzorky tkáně.
■ Jednoduchá: operace extrakce genomové DNA může být dokončena za 30 minut.
■ Pohodlné: Centrifugace se provádí při pokojové teplotě, není vyžadována 4℃ nízkoteplotní centrifugace ani srážení DNA ethanolem.
■ Bezpečnost: nevyžaduje se žádné organické činidlo.
■ Vysoká kvalita: Purifikovaná genomová DNA má velké fragmenty, žádnou RNA, žádnou RNázu a extrémně nízký obsah iontů, může splnit požadavky různých experimentů.
Aplikace sady
Vhodné pro extrakci a purifikaci genomové DNA z čerstvých nebo zmrazených rostlinných tkání.
Pracovní postup
Diagram
Skladování a trvanlivost
Soupravu lze skladovat 12 měsíců při pokojové teplotě (15–25 ℃) a 2–8 ℃ po delší dobu.
Roztok Foregene Protease Plus má unikátní složení, které je aktivní při dlouhodobém skladování při pokojové teplotě (3 měsíce);jeho aktivita a stabilita bude lepší při skladování4℃, proto se doporučuje skladovat při 4℃, nezapomeňte, že neskladujte při -20℃.
Průvodce analýzou problémů
The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.
Nízký výtěžek nebo žádná DNA
Obvykle existuje mnoho faktorů, které ovlivňují výtěžek genomové DNA, včetně zdroje vzorku, stáří vzorku, podmínek skladování vzorku a operace.
Během extrakce nebylo možné získat genomovou DNA
1. Vzorky tkáně jsou nesprávně skladovány nebo skladovány příliš dlouho, což vede k degradaci genomové DNA.
Doporučení: Vzorky tkání skladujte v kapalném dusíku nebo -20°C;zkuste použít nově odebrané vzorky pro extrakci genomové DNA.
2. Příliš malé množství vzorku může způsobit, že odpovídající genomová DNA nebude extrahována.
Návrh: U tkáňových vzorků, které byly skladovány po dlouhou dobu nebo mají vážnou degradaci genomové DNA, lze množství tkáňových vzorků vhodně zvýšit, aby se extrahovala značná genomová DNA.Množství vzorku lze určit podle potřeb DNA, ale čerstvý vzorek by neměl překročit 100 mg a suchý vzorek by neměl překročit 30 mg.
3. Vzorek není rozemlet kapalným dusíkem nebo umístěn příliš dlouho po kapalném dusíku.
Návrh: Během extrakce DNA je třeba vzorek zcela rozemlít kapalným dusíkem, aby se porušila buněčná stěna;po rozemletí přeneste vzorek prášku do PL1 předehřátého na 65°C co nejdříve (jakmile se rozemletý prášek roztaví, genomová DNA začne rychle degradovat) .
4. Nesprávné skladování Foregene Protease má za následek sníženou nebo inaktivovanou aktivitu.
Doporučení: Potvrďte podmínky skladování Foregene Protease nebo ji vyměňte za novou Foregene Protease pro enzymatickou hydrolýzu.
5. Sada je nesprávně skladována nebo skladována příliš dlouho, což způsobuje selhání některých součástí sady.
Doporučení: Kupte si novou soupravu pro extrakci genomové DNA rostliny pro související operace.
6. Nesprávné použití soupravy.
Doporučení: Kupte si sadu Plant DNA Isolation Kit věnovanou vzorkům pro extrakci a purifikaci rostlinné genomové DNA.
7. Buffer WB bez přidání abezvodý ethanol.
Doporučení: Ujistěte se, že jste do pufru WB přidali správný objem absolutního etanolu.
8. Eluent nebyl správně nakapán na membránu oxidu křemičitého.
Návrh: Přidejte předehřátý eluent na 65℃po kapkách do středu silikagelové membrány a ponechá se při pokojové teplotě po dobu 5 minut, aby se zvýšila účinnost eluce.
Extrakce pro získání genomové DNA s nízkým výtěžkem
1. Vzorek je nesprávně skladován nebo skladován příliš dlouho, což má za následek degradaci genomové DNA.
Doporučení: Vzorky tkáně skladujte při -20℃;zkuste použít nově odebrané vzorky tkáně pro extrakci genomové DNA.
2. Pokud je množství vzorků tkáně příliš malé, bude extrahovaná genomická DNA menší.
Doporučení: Některé vzorky rostlin jsou bohaté na vodu, např. vodní rostliny jako řasy apod., lze dávku vhodně zvýšit nebo vodu před operací trochu vysušit.
3. Vzorky nebyly důkladně rozemlety kapalným dusíkem nebo byly po rozemletí ponechány při pokojové teplotě příliš dlouho.
Návrh: Mletí kapalným dusíkem musí být dostatečné a stěna vzorku by měla být co nejvíce rozbitá;ihned po mletí by měl být vzorek prášku přenesen do 65℃předehřátý pufr PL1 pro další krok.
4. Nepoužíváte správnou sadu.
Doporučení: Použijte speciální sadu Plant DNA Isolation Kit k extrakci a čištění rostlinné genomové DNA.
5. Nesprávné skladování Foregene Protease má za následek sníženou nebo inaktivovanou aktivitu.
Doporučení: Potvrďte podmínky skladování Foregene Protease nebo ji vyměňte za novou Foregene Protease pro enzymatickou hydrolýzu.
6. Problém eluentu
Doporučení: Pro eluci použijte pufr EB;pokud používáte ddH2O nebo jiné eluenty, ujistěte se, že pH eluentu je mezi 7,0-8,5.
7. Eluent neodkapává správně
Doporučení: Přidejte eluční kapku do středu silikagelové membrány a nechte ji při pokojové teplotě po dobu 5 minut, abyste zvýšili účinnost eluce.
8. Objem eluentu je příliš malý
Návrh: Použijte eluent pro eluci genomové DNA podle pokynů, alespoň ne méně než 100μl.
Extrahovaná genomová DNA s nízkou čistotou
Nízká čistota genomové DNA povede k selhání nebo špatnému účinku následných experimentů, jako například: enzym nelze štěpit a fragment cílového genu nelze získat pomocí PCR.
1. Kontaminace různými proteiny, kontaminace RNA.
Analýza: K promytí kolony nebyl použit pufr PW;Pufr PW nebyl použit k promývání kolony správnou rychlostí centrifugace.
Návrh: pokuste se zajistit, aby při průchodu supernatantu kolonou nedocházelo k žádné srážení v supernatantu;nezapomeňte promýt purifikační kolonu pomocí Buffer PW podle pokynů a tento krok nelze vynechat.
2. Znečištění ionty nečistot.
Analýza: Promývací kolona Buffer WB byla vynechána nebo byla promyta pouze jednou, což vedlo ke zbytkové iontové kontaminaci.
Doporučení: Ujistěte se, že promyjete dvakrát pomocí Buffer WB podle návodu, abyste co nejvíce odstranili zbytkové ionty.
3. Kontaminace RNázou.
Analýza: Exogenní RNáza je přidána do pufru;nesprávná operace promývání v pufru PW bude mít za následek reziduální RNázu a ovlivní následné experimentální operace RNA, jako je in vitro transkripce.
Návrh: Sady pro extrakci nukleových kyselin řady Foregene mohou odstranit RNA bez další RNázy a všechna činidla v soupravě Plant DNA Isolation Kit nepotřebují RNázu;nezapomeňte promýt purifikační kolonu pomocí Buffer PW podle pokynů a tento krok nelze vynechat.
4. Ethanolové zbytky.
Analýza: Po promytí purifikační kolony pufrem WB nebyla provedena žádná centrifugace prázdné zkumavky.
Doporučení: Postupujte podle pokynů pro správnou centrifugaci prázdné zkumavky.
Návod k použití:
Návod k použití sady Plant DNA Isolation Kit
