• Facebook
  • linkedin
  • Youtube

Vést

Dlouhá nekódující RNA, lncRNA je nekódující RNA s délkou větší než 200 nukleotidů, obecně mezi 200-100 000 nt.lncRNA reguluje genovou expresi na epigenetické, transkripční a post-transkripční úrovni a podílí se na umlčování chromozomu X, imprintingu genomu a modifikaci chromatinu, aktivaci transkripce, transkripční interferenci, jaderném transportu, regulaci buněčného cyklu, regulaci buněčné diferenciace a efektech kompenzace dávky (účinek kompenzace dávky) a mnoho dalších důležitých regulačních procesů v současné době úzce souvisí s výskytem, ​​vývojem a prevencí lidských onemocnění.

01  Typy a charakteristiky LncRNA

novinky723 (1)

lncRNA se dělí na mnoho typů podle různých zdrojů jejího vzniku, jak je znázorněno na obrázku výše.Má následující vlastnosti:

1. lncRNA jsou obvykle delší, s dynamickou expresí a různými metodami sestřihu během diferenciace
2. Ve srovnání s kódujícími geny má lncRNA obvykle nižší úroveň exprese
3. Většina lncRNA má zjevnou časovou a prostorovou expresní specificitu v procesu diferenciace a vývoje tkání
4. Existují charakteristické projevy u nádorů a jiných onemocnění
5. Subcelulární umístění lncRNA jsou různorodá
6. Posloupnost je málo konzervovaná, ale funkce má určitý stupeň zachování atp.

02 Často kladené otázky o reverzní transkripci LncRNA

Kvůli nízkému obsahu lncRNA v buňkách, dlouhé délce a vysokoúrovňové struktuře má taková RNA často složité struktury, jako jsou stonkové smyčky nebo vlásenky, a RT-qPCR je náchylná k problémům s neúspěšnou reverzní transkripcí nebo nízkou účinností.

03 Roztok pro reverzní transkripci LncRNA

novinky723 (2)

V ústředním pravidle se proces RNA virů využívajících jejich vlastní reverzní transkriptázu k syntéze DNA pomocí RNA jako templátu nazývá reverzní transkripce.Proces použití reverzní transkriptázy viru RNA k syntéze templátu cDNA in vitro se nazývá reverzní transkripce.Hlavní prvky zahrnuté v systému reverzní transkripce: RNA templát, reverzní transkriptáza, primery a další složky.

1. Templát RNA

Vliv templátu RNA na reverzní transkripci se odráží v jeho struktuře, čistotě a integritě.Čím vyšší je čistota a integrita extrahované RNA, tím vyšší je účinnost reverzní transkripce a tím přesnější jsou následné kvantitativní výsledky.RNA purifikovaná běžně používanými RNA extrakčními činidly často obsahuje zbytky alkoholových a guanidinových solí, které mají silný inhibiční účinek na většinu reverzní transkriptázy.

2.Reverzní transkriptáza

Reverzní transkriptáza má klíčový vliv v celém systému reverzní transkripce.Vhodná teplota pro reverzní transkriptázu používanou ve většině laboratoří je obecně 42 °C.Otevření struktury vysokoúrovňové RNA ve skutečnosti vyžaduje vyšší teplotu a požadavky na reverzní transkriptázu jsou vyšší.

3.Základní nátěr

Primery pro reverzní transkripci zahrnují genově specifické primery, náhodné primery a primery Oligo dT.Většina lncRNA neobsahuje polyA konce a je důležité správně porovnat náhodné primery s Oligo dT.

4. Další komponenty

Vzhledem ke skutečnosti, že RNA je obzvláště snadno degradovatelná, lze minimalizovat zavádění složek do systému reverzní transkripce, což může účinně zabránit vstupu RNázy a zajistit hladký průběh reverzní transkripce.

Foregenzískává z RNA templátu, reverzní transkripci do qPCR

Komplexně doprovázejte vaši detekci lncRNA

novinky723 (3)

Celková RNA zvířat IútěchaSada (s kolonou pro odstranění gDNA)

novinky723 (4)

Celková RNA buňky IútěchaSada (s kolonou pro odstranění gDNA)

novinky723 (5)

Lnc-RT HeroTM I (s gDNázou) (Super Premix pro syntézu prvního řetězce cDNA z lncRNA)

novinky723 (6)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Avýhody ofExtrakce RNA:

Sada využívá technologii extrakce RNA třetí generace, není třeba používat DNázu.

11 minut z 96, 24, 12 a 6-jamkových destiček kultivovaných buněk, vysoce účinná extrakce bez gDNA, vysoce čistá, vysoce kvalitní celková buněčná RNA.

Výhody reverzní transkripce lncRNA:

Systém reverzní transkripce speciálně vyvinutý pro LncRNA k rychlému odstranění kontaminace genomovou DNA.

Systém reverzní transkripce má vysokou tepelnou stabilitu a stále má dobrou účinnost reverzní transkripce při 50 °C.

Šablony s vysokým obsahem GC a složitou sekundární strukturou lze s vysokou účinností obrátit.

Výhodyof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase má vyšší účinnost amplifikace, vyšší citlivost amplifikace a vyšší amplifikační specificitu

Díky optimalizovanému Real PCR Easy Mix má SYBR Green I vyšší citlivost detekce a jeho intenzita fluorescence je 3-5krát vyšší než u podobných produktů, což může splnit potřeby různých typů fluorescenčních kvantitativních experimentů.


Čas odeslání: 23. července 2021