Vést
Dlouhá nekódující RNA, lncRNA je nekódující RNA s délkou větší než 200 nukleotidů, obecně mezi 200-100 000 nt.lncRNA reguluje genovou expresi na epigenetické, transkripční a post-transkripční úrovni a podílí se na umlčování chromozomu X, imprintingu genomu a modifikaci chromatinu, aktivaci transkripce, transkripční interferenci, jaderném transportu, regulaci buněčného cyklu, regulaci buněčné diferenciace a efektech kompenzace dávky (účinek kompenzace dávky) a mnoho dalších důležitých regulačních procesů v současné době úzce souvisí s výskytem, vývojem a prevencí lidských onemocnění.
01 Typy a charakteristiky LncRNA
lncRNA se dělí na mnoho typů podle různých zdrojů jejího vzniku, jak je znázorněno na obrázku výše.Má následující vlastnosti:
1. lncRNA jsou obvykle delší, s dynamickou expresí a různými metodami sestřihu během diferenciace
2. Ve srovnání s kódujícími geny má lncRNA obvykle nižší úroveň exprese
3. Většina lncRNA má zjevnou časovou a prostorovou expresní specificitu v procesu diferenciace a vývoje tkání
4. Existují charakteristické projevy u nádorů a jiných onemocnění
5. Subcelulární umístění lncRNA jsou různorodá
6. Posloupnost je málo konzervovaná, ale funkce má určitý stupeň zachování atp.
02 Často kladené otázky o reverzní transkripci LncRNA
Kvůli nízkému obsahu lncRNA v buňkách, dlouhé délce a vysokoúrovňové struktuře má taková RNA často složité struktury, jako jsou stonkové smyčky nebo vlásenky, a RT-qPCR je náchylná k problémům s neúspěšnou reverzní transkripcí nebo nízkou účinností.
03 Roztok pro reverzní transkripci LncRNA
V ústředním pravidle se proces RNA virů využívajících jejich vlastní reverzní transkriptázu k syntéze DNA pomocí RNA jako templátu nazývá reverzní transkripce.Proces použití reverzní transkriptázy viru RNA k syntéze templátu cDNA in vitro se nazývá reverzní transkripce.Hlavní prvky zahrnuté v systému reverzní transkripce: RNA templát, reverzní transkriptáza, primery a další složky.
1. Templát RNA
Vliv templátu RNA na reverzní transkripci se odráží v jeho struktuře, čistotě a integritě.Čím vyšší je čistota a integrita extrahované RNA, tím vyšší je účinnost reverzní transkripce a tím přesnější jsou následné kvantitativní výsledky.RNA purifikovaná běžně používanými RNA extrakčními činidly často obsahuje zbytky alkoholových a guanidinových solí, které mají silný inhibiční účinek na většinu reverzní transkriptázy.
2.Reverzní transkriptáza
Reverzní transkriptáza má klíčový vliv v celém systému reverzní transkripce.Vhodná teplota pro reverzní transkriptázu používanou ve většině laboratoří je obecně 42 °C.Otevření struktury vysokoúrovňové RNA ve skutečnosti vyžaduje vyšší teplotu a požadavky na reverzní transkriptázu jsou vyšší.
3.Základní nátěr
Primery pro reverzní transkripci zahrnují genově specifické primery, náhodné primery a primery Oligo dT.Většina lncRNA neobsahuje polyA konce a je důležité správně porovnat náhodné primery s Oligo dT.
4. Další komponenty
Vzhledem ke skutečnosti, že RNA je obzvláště snadno degradovatelná, lze minimalizovat zavádění složek do systému reverzní transkripce, což může účinně zabránit vstupu RNázy a zajistit hladký průběh reverzní transkripce.
Foregenzískává z RNA templátu, reverzní transkripci do qPCR
Komplexně doprovázejte vaši detekci lncRNA
Celková RNA zvířat IútěchaSada (s kolonou pro odstranění gDNA)
Celková RNA buňky IútěchaSada (s kolonou pro odstranění gDNA)
Lnc-RT HeroTM I (s gDNázou) (Super Premix pro syntézu prvního řetězce cDNA z lncRNA)
Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I
Avýhody ofExtrakce RNA:
Sada využívá technologii extrakce RNA třetí generace, není třeba používat DNázu.
11 minut z 96, 24, 12 a 6-jamkových destiček kultivovaných buněk, vysoce účinná extrakce bez gDNA, vysoce čistá, vysoce kvalitní celková buněčná RNA.
Výhody reverzní transkripce lncRNA:
Systém reverzní transkripce speciálně vyvinutý pro LncRNA k rychlému odstranění kontaminace genomovou DNA.
Systém reverzní transkripce má vysokou tepelnou stabilitu a stále má dobrou účinnost reverzní transkripce při 50 °C.
Šablony s vysokým obsahem GC a složitou sekundární strukturou lze s vysokou účinností obrátit.
Výhodyof qPCR:
Hot start Foregene Taq Polymerase má vyšší účinnost amplifikace, vyšší citlivost amplifikace a vyšší amplifikační specificitu
Díky optimalizovanému Real PCR Easy Mix má SYBR Green I vyšší citlivost detekce a jeho intenzita fluorescence je 3-5krát vyšší než u podobných produktů, což může splnit potřeby různých typů fluorescenčních kvantitativních experimentů.
Čas odeslání: 23. července 2021