Budování SOP systému

Vytvořte SOP experimentu PCR pro standardizaci chování personálu experimentu.

Experimentátoři přísně dodržují provozní postupy a minimalizují znečištění PCR, které může být způsobeno lidským faktorem, nebo zabraňují vzniku znečištění v provozu.Kromě toho by měl mít experimentátor odpovídající odborné znalosti a dovednosti, včetně odbornosti v obsluze souvisejících zařízení, objasnění celého pracovního procesu, zvládnutí metod ošetření kontaminace a laboratorních metod kontroly kvality a umět správně interpretovat výsledky zkoušek.

Budova standardní PCR laboratoře

Laboratoř PCR je v zásadě rozdělena do čtyř oblastí, a to oblast přípravy reagencií, oblast zpracování vzorků, oblast amplifikace a oblast analýzy produktu amplifikace.První dvě oblasti jsou oblasti před amplifikací a poslední dvě oblasti jsou oblasti po amplifikaci.Předamplifikační zóna a poamplifikační zóna by měly být přísně odděleny.Experimentální materiály, činidla, záznamový papír, pera, čisticí materiály atd. mohou proudit pouze z oblasti před amplifikací do oblasti po amplifikaci, to znamená z oblasti pro přípravu reagencií, oblasti zpracování vzorků, oblasti amplifikace a oblasti analýzy amplifikačního produktu, a nesmí proudit v opačném směru.Proud vzduchu v laboratoři by měl také proudit z oblasti před amplifikací do oblasti po amplifikaci, nikoli v opačném směru.

Omezte experimentální kroky

Pokud laboratoř provádí pouze PCR detekci a identifikaci, doporučuje se místo klasické PCR použít fluorescenční kvantitativní PCR.

Výsledky fluorescenční kvantitativní PCR detekce lze shromažďovat a analyzovat pomocí fluorescenčních signálů, takže po reakci není nutné otevírat víko pro elektroforézu, což zabraňuje kontaminaci produktů PCR způsobené únikem reakčních produktů za vzniku aerosolů.Pokud zvýšíte počet otevření uzávěru během kroku nanášení gelové elektroforézy, pravděpodobně dojde ke kontaminaci aerosolem.Doporučuje se podporovat aplikaci kvantitativní PCR a postupně nahrazovat kvalitativní PCR.

Přijměte systém proti znečištění UNG

Pro PCR reakci se používá systém kontaminace produktu UNG anti-PCR.

Systém používá dUTP místo dTTP.Po PCR reakci jsou všechny produkty PCR (fragmenty DNA) inkorporovány s dUTP;v dalším kole PCR reakce je enzym UNG přidaný do systému inkubován při 37 °C po dobu 5 minut před PCR, která může být specifická Degradujte všechny fragmenty DNA obsahující dUTP a poté proveďte PCR reakci.Tím lze zcela odstranit kontaminaci aerosolem způsobenou produkty PCR.Efekt je znázorněn na obrázku níže:

Poznámka: Pro přímou sérii PCR si můžete vybrat sériové produkty systému znečištění produktů anti-PCR společnosti FJ Biotech

Navrhněte

Pro laboratoře, které provádějí rozsáhlé genotypizační testování, se důrazně doporučuje kromě výstavby rozumných laboratoří používat k testování reagencií systém kontaminace produktů UNG anti-PCR.

Připomenutí: Použití tohoto systému nemůže odstranit kontaminaci produktu PCR, která již byla způsobena.Proto by měl být systém UNG použit na začátku příslušného testu a systém UNG by měl být vždy použit pro amplifikaci PCR, aby se zabránilo kontaminaci produktů PCR.Falešně pozitivní.

Při provádění testování ve velkém měřítku se doporučuje použít systém Direct PCR-UNG společnosti Forge Biotech, jako je: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；

Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Tato řada kitů od Foregene dokáže nejen rychle a ve velkém provádět PCR detekci, ale také účinně předcházet a kontrolovat kontaminaci PCR produktů.