Vytvořte SOP experimentu PCR pro standardizaci chování personálu experimentu.
Experimentátor přísně dodržuje provozní postupy a minimalizuje znečištění PCR, které může být způsobeno lidským faktorem, nebo zabraňuje vzniku znečištění.Kromě toho by měl mít experimentátor odpovídající odborné znalosti a dovednosti, včetně odbornosti v obsluze souvisejících zařízení, objasnění celého pracovního procesu, zvládnutí metod ošetření kontaminace a laboratorních metod kontroly kvality a umět správně interpretovat výsledky zkoušek.
Zřídit standardní PCR laboratoř.
PCR laboratoř je v zásadě rozdělena do čtyř oblastí, a to oblast přípravy reagencií, oblast zpracování vzorků, oblast amplifikace a oblast analýzy produktu amplifikace.První dvě oblasti jsou oblasti před amplifikací a poslední dvě oblasti jsou oblasti po amplifikaci.Předamplifikační zóna a poamplifikační zóna by měly být přísně odděleny.Experimentální materiály, činidla, záznamový papír, pera, čisticí materiály atd. mohou proudit pouze z oblasti před amplifikací do oblasti po amplifikaci, tj. z oblasti pro přípravu reagencií → oblasti zpracování vzorku → oblasti amplifikace → oblasti analýzy amplifikačního produktu, a nesmí proudit zpět.Proud vzduchu v laboratoři by měl také proudit z oblasti před amplifikací do oblasti po amplifikaci a neměl by proudit zpět.Ideální design laboratoře PCR je uveden níže:
Obrázek A: Ideální režim laboratorního nastavení PCR s podtlakem v pufrovací místnosti
Obrázek B: Ideální režim laboratorního nastavení PCR s pozitivním tlakem v pufrovací místnosti
Schémata nastavení laboratoře PCR uvedená na Obrázku A a Obrázku B by měla být ideálnějším režimem nastavení a laboratoř s podmínkami může tento režim navrhnout.Pro běžné laboratoře se doporučuje, aby bylo možné oddělit oblast PCR amplifikace a oblast analýzy produktu a otevření krytu by mělo být co nejvíce omezeno v oblasti přípravy vzorku a oblasti amplifikace PCR.Pamatujte: Produkty a experimentální zásoby v oblasti analýzy produktů je přísně zakázáno přenášet do oblasti pro přípravu vzorků a oblasti amplifikace PCR.
Pokud laboratoř provádí pouze PCR detekci a identifikaci, doporučuje se místo klasické PCR použít fluorescenční kvantitativní PCR.
Výsledky fluorescenční kvantitativní PCR detekce lze shromažďovat a analyzovat pomocí fluorescenčních signálů, takže po reakci není nutné otevírat víko pro elektroforézu, což zabraňuje kontaminaci produktu PCR způsobené únikem reakčních produktů za vzniku aerosolů.Pokud zvýšíte počet otevření uzávěru během kroku nanášení gelové elektroforézy, pravděpodobně dojde ke kontaminaci aerosolem.Doporučuje se podporovat aplikaci kvantitativní PCR a postupně nahrazovat kvalitativní PCR.
Pro PCR reakci se používá systém kontaminace produktu UNG anti-PCR.
Systém používá dUTP místo dTTP.Po PCR reakci jsou všechny produkty PCR (fragmenty DNA) inkorporovány s dUTP;v dalším kole PCR reakce je enzym UNG přidaný do systému inkubován při 37 °C po dobu 5 minut před PCR, která může specificky degradovat všechny fragmenty DNA obsahující dUTP, a poté provést PCR reakci.Tím lze zcela odstranit kontaminaci aerosolem způsobenou produkty PCR.Efekt je znázorněn na obrázku níže:
Poznámka: Pro přímou sérii PCR si můžete vybrat sériové produkty systému kontaminace produktů anti-PCR společnosti ForegeneNavrhněte
Pro laboratoře, které provádějí rozsáhlé genotypizační testování, se důrazně doporučuje kromě výstavby rozumných laboratoří používat k testování reagencií systém kontaminace produktů UNG anti-PCR.
Připomenutí: Použití tohoto systému nemůže odstranit kontaminaci produktu PCR, která již byla způsobena.Proto by měl být systém UNG použit na začátku příslušného testu a systém UNG by měl být použit pro amplifikaci PCR, aby se zabránilo kontaminaci produktů PCR Falešně pozitivní.
Při provádění rozsáhlých testů, jako jsou:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Tato řada stavebnic od Foregenemůže nejen provádět PCR detekci rychle a ve velkém měřítku, ale také účinně předcházet a kontrolovat kontaminaci PCR produktů.
Čas odeslání: 19. března 2021
