W:Brother, reverzní transkripce je dokončena a konečně poslední krok – fluorescenční kvantitativní PCR!Hej, bratře, co je to kvantitativní PCR v reálném čase?
M:PCR vždy víte, že?
W: Víte, PCR je polymerázová řetězová reakce a je to technologie, která zvyšuje DNA!
M: Je to skoro… Je to technická metoda, jak amplifikovat cílovou sekvenci více než milionkrát pomocí specifických primerů, ale to pouze indikuje přítomnost nebo nepřítomnost cílové sekvence a nemůže určit množství výchozího templátu.Fluorescenční kvantitativní PCR je technická metoda vyvinutá pro řešení tohoto problému.PCR v reálném čase a kvantitativní PCR (qPCR) ji obecně označují.
W: Rozdíl od běžné PCR spočívá v kvantifikaci fluorescence?
M:Ano, to znamená, že ve fázi prodloužení každého cyklu PCR je detekována intenzita fluorescenčního signálu a počáteční množství templátu lze vypočítat podle změny intenzity signálu.
W: Připadá mi to tak složité!Musím si to spočítat sám?
M: To vyžaduje, abyste se učili pomalu, nejlepší je umět pochopit princip.Nyní se můžete nejprve zaměřit na hodnotu CT, což jsou poměrně intuitivní experimentální data a její velikost odpovídá velikosti počátečního množství šablony.Existují také grafy, jako jsou křivky zesílení a křivky tání.Mají konečné slovo o tom, zda je váš experiment úspěšný nebo ne.
W: Oh, bratře.Pak udělám experiment qPCR!
M: Věnujte zvláštní pozornost tomu, abyste do oblasti reagencií nepřidávali šablony, jinak se vaše nepoužitá směs snadno kontaminuje!
W: Rozumím!

Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Vyšší účinnost, větší specifičnost
Vysoká citlivost, dobrá kompatibilita